一种山楂果肉愈伤组织培养用培养基及其培养方法

本发明涉及山楂组织培养，尤其涉及一种山楂果肉愈伤组织培养用培养基及其培养方法。

背景技术：

1、山楂为蔷薇科山楂属植物，果实颜色鲜艳，成熟时呈红色或深红色，花期集中在5～6月份，结果期在9～10月份。山楂是一种药食同源，营养丰富的水果，口感酸甜，有消食、健脾、健胃的功效。山楂中的多酚类化合物具有很强的抗氧化能力，可以直接清除自由基、对自由基的产生造成抑制；山楂中的黄酮类化合物具有很强的抗氧化能力，可以清除机体中的氧自由基，可以防止与延缓细胞的衰老凋亡，还有一定的抗癌能力。愈伤组织是指外植体在离体培养条件下，形成的一团无极性、能旺盛分裂的薄壁细胞团，在培养过程中，经过诱导分化可以发育成完整的再生植株。愈伤组织是植物的外植体经过脱分化形成的，多种外植体都可以经过组织培养诱导形成愈伤组织，而植物愈伤组织因为具有以下特点而被广泛应用于植物分子机理和基因工程研究中。愈伤组织的特点：①无性繁殖，大量扩繁；②为细胞悬浮培养和次生代谢产物生产与利用、原生质体培养和细胞融合提供材料；③为植物体细胞无性系变异、细胞突变体筛选创造适宜的体系和基础；④为外源基因的遗传转化提供便于保存和利用的操对象；⑤为离体研究植物组织和细胞分裂、分化、代谢和状态的转变创造适宜的材料和体系。

2、目前对于山楂愈伤组织的研究多集中在叶片的愈伤组织，随着技术的进步与研究的深入，与山楂品质形成相关的分子机理逐渐成为基因组研究热点。在山楂果实分子机理研究方面，愈伤组织是常用的实验材料，但其他器官的愈伤组织不适用于山楂品质形成相关基因的研究，因此果实愈伤组织与其他器官的愈伤组织相比，有不可替代的优势。培养山楂果肉的愈伤组织是研究山楂果实品质形成相关分子机理的一条非常重要的途径。

技术实现思路

1、因此，基于以上背景，本发明提供一种山楂果肉愈伤组织培养用培养基及其培养方法，建立高效快速的山楂果肉愈伤组织培养体系，果实愈伤组织脱分化率可达到100％。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种山楂果肉愈伤组织培养用培养基，其包括诱导培养基和增殖培养基；

4、所述诱导培养基为ms培养基：

5、每升培养基中具有30g·l-1蔗糖、8g·l-1琼脂、0.5mg·l-1 6-ba+1.0mg·l-1 2，4-d；

6、所述增殖培养基为ms培养基：

7、每升培养基中具有30g·l-1蔗糖、8g·l-1琼脂、0.25mg·l-1 6-ba、1.0mg·l-12，4-d。

8、进一步地，所述诱导培养基和增殖培养基的ph值均为5.8。

9、本发明还提供了一种山楂果肉愈伤组织培养方法，其采用上述的培养基进行培养。

10、进一步地，其包括如下步骤：

11、s1：外植体的选取及其处理

12、1)将清洗后的山楂果实，用流水冲洗后，去除山楂果梗，切除果脐后，置于无菌水中浸泡；

13、2)取出山楂果实，去除表面水分，用酒精消毒后用无菌水清洗多次，然后再用次氯酸钠浸泡后，再次用无菌水清洗多次，最后去除水分；

14、s2：山楂果实诱导培养

15、将步骤s1处理后的山楂果实横切成1mm厚的薄片，无菌接种于诱导培养基中，将接种好的外植体置于黑暗中，20-25℃培养20-25天；

16、经验证，上诱导培养时间为最佳时间，时间过短，则愈伤组织诱导较少，而时间过长，则愈伤会发生褐化；20-25天可达到继代要求。

17、s3：山楂果实增殖培养

18、取下步骤s2外植体周围诱导出的愈伤组织，无菌接种于增殖培养基中，黑暗中培养30天。

19、优选地，步骤s1中山楂取开花后18-25天后果实。

20、采用本发明实现的有益效果如下：·

21、本发明提供了一种高效快速的山楂果肉愈伤组织培养方法，通过对山楂果肉进行诱导培养和增殖培养，可获得大量优质优良的果肉愈伤组织，诱导分化率高，可高达100％，可为山楂果实品质形成相关分子机理的研究提供可靠的实验材料。

技术特征：

1.一种山楂果肉愈伤组织培养用培养基，其特征在于，其包括诱导培养基和增殖培养基；

2.根据权利要求1所述的一种山楂果肉愈伤组织培养用培养基，其特征在于，所述诱导培养基和增殖培养基的ph值均为5.8。

3.一种山楂果肉愈伤组织培养方法，其特征在于，其采用权利要求1或2所述的培养基进行培养。

4.根据权利要求3所述的一种山楂果肉愈伤组织培养方法，其特征在于，其包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的一种山楂果肉愈伤组织培养方法，其特征在于，步骤s1中山楂取开花后18-25天后果实。

技术总结
本发明公开一种山楂果肉愈伤组织培养用培养基及其培养方法，其诱导培养基每升培养基中具有30g·L‑1蔗糖、8g·L‑1琼脂、0.5mg·L‑1 6‑BA+1.0mg·L‑1 2，4‑D；增殖培养基每升培养基中具有30g·L‑1蔗糖、8g·L‑1琼脂、0.25mg·L‑1 6‑BA、1.0mg·L‑12，4‑D。其培养过程包括外植体的选取及其处理、山楂果实诱导培养、山楂果实增殖培养，因此，本发明提供了一种高效快速的山楂果肉愈伤组织培养方法，通过对山楂果肉进行诱导培养和增殖培养，可获得大量优质优良的果肉愈伤组织，诱导分化率高，可高达100％，可为山楂果实品质形成相关分子机理的研究提供可靠的实验材料。

技术研发人员：索文科
受保护的技术使用者：沈阳农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16