本发明涉及植物组培，具体来说是一种南非龟甲龙组培育苗方法及应用。

背景技术：

1、南非龟甲龙（拉丁学名： dioscorea elephantipes），薯蓣科薯蓣属多肉块茎植物。南非龟甲龙块茎表面纹理奇特，形似龟甲。龟甲龙在培养土、水分、光照、温湿度及通风等控制好的情况下，也能较好地生长，块茎浅褐色，幼小时呈圆形，长大后根部分成许多小块，如石头堆栈状，宛如龟甲，其名便由此而来。茎绿色，蔓性，长1～2m。叶心形三角状，长6～7cm。

2、目前南非龟甲龙的繁育方法主要是种子繁殖和扦插繁殖，每年3-4月，龟甲龙的叶片会开始变黄，随后掉落，开始进入休眠期。此时，从基部将蔓茎切除，只留下软木塞状的瘤块，放于凉爽的半日阴处，逐渐减少给水，待初秋开始，约9月左右之后，新的芽会冒出来。龟甲龙用种子来繁殖，但必须培养茎干至少3年多以上才会长出，相当耗时又不方便。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对南非龟甲龙种子繁殖和扦插繁殖存在的问题，提供一种南非龟甲龙组培育苗方法及应用。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种南非龟甲龙组培育苗方法，步骤包括：

3、（1）用幼嫩枝条作为外植体，经清洗后，依次用酒精、漂白粉溶液以及升汞消毒；

4、（2）将消毒后的外植体接种于以ms为基本培养基，添加适宜浓度naa、2,4-d、zt及cppu的初代诱导培养基中培养25～35天；

5、所述naa浓度为0.1～0.2mg/l、2,4-d浓度为 0.02～0.05mg/l、zt 浓度为0.3～0.5mg/l、cppu 浓度为0.1～0.2mg/l；

6、（3）经初代诱导获得的芽，接种于以ms为基本培养基，添加适宜浓度iba、zt以及kt的丛生芽增殖培养基中培养30～40天；

7、所述iba 浓度为0.05～0.08mg/l、zt浓度为 0.2～0.3mg/l、kt浓度为 3.0～4.0mg/l；

8、（4）将经丛生芽增殖的芽，接种于以ms为基本培养基，添加适宜浓度iba、6-ba以及椰汁与活性炭的生根培养基中培养30～60天；

9、所述iba浓度为0.6～0.7mg/l、kt浓度为0.2～0.3mg/l、椰汁浓度为40～50mg/l、活性炭浓度为0.2～0.3g/l。

10、进一步的，步骤（1）中，消毒具体步骤为：75%酒精消毒15～20s、无菌水洗涮2～3次，饱和漂白粉溶液消毒20～22min、无菌水洗涮4～5次，0.05%升汞溶液消毒5～6min、无菌水洗涮6～8次。

11、进一步的，步骤（2）中，所述naa浓度为0.1mg/l、2,4-d浓度为 0.03mg/l、zt 浓度为0.4mg/l、cppu 浓度为0.15mg/l。

12、进一步的，步骤（3）中，所述iba 浓度为0.06mg/l、zt浓度为 0.25mg/l、kt浓度为3.5mg/l。

13、进一步的，步骤（4）中，所述iba浓度为0.65mg/l、kt浓度为0.25mg/l、椰汁浓度为45mg/l、活性炭浓度为0.25g/l。

14、进一步的，步骤（2）、（3）和（4）的培养条件为：温度25±2℃，每日照光10～14h，光强2000～3000lx的光暗交替培养。

15、本发明的有益技术效果是：

16、1、本发明采用75%酒精、饱和漂白粉溶液和0.05%升汞溶液消毒，可使消毒污染率降低至14%以下，同时消毒死亡率降低至3%，亦几乎不会诱导褐化的发生。

17、2、本发明初代培养基采用ms+naa0.1～0.2mg/l+2,4-d 0.02～0.05mg/l+zt 0.3～0.5mg/l+cppu 0.1～0.2mg/l，可直接诱导产生丛生芽，几乎不产生愈伤，可最大程度的降低变异的发生，且丛生芽诱导率高达90%以上。

18、3、经研究发现naa有一定程度的抑制南非龟甲龙的生根，而本发明在丛生芽增殖培养基中，将2,4-d和naa改为适宜浓度的iba，同时降低或去掉高成本zt和cppu，寻找更加廉价的kt进行增殖，能达到最佳的增殖效果的同时，还能很大程度的降低实际生产成本。

19、4、本发明在南非龟甲龙的生根培养时，创造性的添加适宜浓度的椰汁，一方面可增加生根率，缩短生根培养时间，另一方面还可最大程度的使苗更加健壮，可提高瓶苗驯化时的成活率。

技术特征：

1.南非龟甲龙组培育苗方法，其特征在于，步骤包括：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（1）中，消毒具体步骤为：75%酒精消毒15～20s、无菌水洗涮2～3次，饱和漂白粉溶液消毒20～22min、无菌水洗涮4～5次，0.05%升汞溶液消毒5～6min、无菌水洗涮6～8次。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（2）中，所述naa浓度为0.1mg/l、2,4-d浓度为 0.03mg/l、zt 浓度为0.4mg/l、cppu 浓度为0.15mg/l。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（3）中，所述iba 浓度为0.06mg/l、zt浓度为 0.25mg/l、kt浓度为 3.5mg/l。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（4）中，所述iba浓度为0.65mg/l、kt浓度为0.25mg/l、椰汁浓度为45mg/l、活性炭浓度为0.25g/l。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（2）、（3）和（4）的培养条件为：温度25±2℃，每日照光10～14h，光强2000～3000lx的光暗交替培养。

7.根据权利要求1-6任一项所述方法在南非龟甲龙组培育苗中的应用。

技术总结
本发明涉及植物组培技术领域，具体来说是一种南非龟甲龙组培育苗方法及应用，具体为：用幼嫩枝条作为外植体，清洗后依次用酒精、漂白粉溶液以及升汞消毒，将消毒后的外植体接种于初代诱导培养基中培养30天，经初代诱导获得的芽接种于丛生芽增殖培养基中培养35天，丛生芽增殖的芽接种于生根培养基中培养45天。本发明采用酒精、饱和漂白粉溶液和升汞溶液消毒，消毒污染率降低至14%以下，消毒死亡率降低至3%，褐化几乎不会发生，丛生芽诱导率高达90%以上；在南非龟甲龙的生根培养时，添加适宜浓度的椰汁，一方面可增加生根率，缩短生根培养时间，另一方面还可最大程度的使苗更加健壮，可提高瓶苗驯化时的成活率。
技术研发人员：邓国宾,李佳康,曾祥飞,邓清,赵露琴,魏春丽,杨如玉
受保护的技术使用者：西南林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21