专利名称：一种尿酸测定酶试剂盒的制备方法
技术领域：
本发明是涉及一种尿酸测定酶试剂盒的制备方法，该试剂盒可用于血清，尿液的尿酸测定，为痛风、肾脏疾病、慢性白血病等疾病的诊断提供准确实验资料，还可用于其它临床或非临床样品的尿酸定量分析。
目前，国内外通常应用的尿酸测定试剂盒是用3，5-二氯-2-羟苯磺酸作色原。此色原较2，4-二氯酚敏感，且溶解性好，但其稳定性较差，敏感性亦尚嫌不足，合成比较困难。为此，近年来国外有人研究应用一种新的色原-2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸，测定尿酸其敏感度高，稳定性强，合成容易，方法准确、精密。如Sanderson在“临床化学”(1983;291285)和Dubois在“临床化学临床生化”杂志(1989;27151)分别报道了应用该色原测定尿酸，具有上述优点，但他们未涉及利用该色原制作尿酸酶试剂盒的情况。
本发明的目的，是提供一种用2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸新色原制造尿酸测定酶试制盒的工艺。包括微生物酶的制备和冻干粉试剂盒的制造方法。
该试剂盒的制备工艺包括微生物的制备和冻干粉试剂盒制造1、将产朊假丝酵母菌微生物酶摇床或在发酵罐中培养，将收获的菌体用PH8.311的缓冲液渗透攻击提取，2-4天后收获菌提取液;
2、用硫酸铵盐析后，收取酶蛋白，过葡聚糖凝胶5-25柱后备用;
3、以间硝基酚、氰溴酸和溴酸盐合成2.4.6-三溴-3-羟基苯甲酸，干燥后备用。
冻干粉试剂盒的制造4、按下列比例制备冻干准备液尿酸酶150-10000U/L，辣根过氧化物酶5000-30000U/L，4-氨基安替比林5-60mmol/L，亚铁氰化钾100-1000μmol/L，其它非反应成份适量;
5、按用途和使用方法不同，将准备液分装成0.5-2.0ml瓶;
6、经低温冷冻，真空干燥后封盖，贮存备用。
用本发明的方法制备的2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸色原酶的试剂盒与现有色原2.4-三氯酚和3.5-二氯-2-羟苯磺酸试剂盒比较，其优点是敏感度分别增加15%和100%，色原溶液稳定期延长200%，合成容易并相应提高了酶盒的抗干扰性能。
实施例将产朊假丝酵母菌种接种于3L液体培养基中培养诱导后，得湿菌160-200克，用PH9缓冲液渗透攻击提取，用硫酸铵盐析，离子交换纤维素色谱，可得酶130-160U;
取辣根过氧化物酶5000-7000U，4-氨基安替比林1-4mmol，2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸9mmol，亚铁氰化钾120μmol，其它非反应成份适量，混合均匀，分装入瓶内，进行低温冷冻，干燥后得尿酸测定酶试剂盒300-400支。
权利要求
1.本发明涉及一种尿酸测定酶试剂盒的制备方法，其特征在于所述的方法包括甲微生物酶的制备流程是a、将产朊假丝酵母菌微生物摇床或在培养罐中培养；收取的菌体用PH8.5-11缓冲液渗透攻击提取，2-4天后，收获菌提取液；b、用硫酸铵盐析后，收取酶蛋白，过葡聚糖凝胶G-25柱后备用；c、以间硝基酚，氰溴酸和溴酸盐合成2.4.6-三溴-3-羟基苯甲酸，干燥后备用；乙冻干试剂盒的制造d、按下列比例制备冻干准备液尿酸5000-30000UL，辣根过氧化物酶5000-30000UL，4-氨基安替比体5－60mmoL/L，亚铁氰化钾100-100μmoUL，其它非反应成份适量；e、按盒的用途和方法不同，将准备液分装成0.5-2.0ml瓶；f、经低温冷冻，真空干燥后封盖，贮存备用。
全文摘要
一种尿酸测定酶试剂盒的制备方法，包括产朊假丝酵母菌微生物酶的培养、提取，2，4，6-三溴-3-羟基苯甲酸色原的合成和冻干准备液的配制，分装，低温冷冻干燥密封等，制成的酶盒敏感度高，稳定性好，抗干扰性能好等优点，可广泛用于血清、尿液的尿酸测定，可为痛风、肾脏疾病、慢性白血病等的诊断提供准确的实验资料。
文档编号C12Q1/62GK1057484SQ9010515
公开日1992年1月1日 申请日期1990年6月20日 优先权日1990年6月20日
发明者刘学成, 苏跃新, 汤瑾瑜, 张淑贤, 王竹, 董洪杰 申请人:中国人民解放军沈阳军区总医院