专利名称：一种可乐定多囊脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及缓释制剂领域，特别涉及一种可乐定多囊脂质体及其制备方法。
背景技术：
可乐定及其盐是20世纪60年代初合成的咪唑啉衍生物，为a 2_肾上腺素受体激
动剂，作为中枢性降压药广泛用于高血压的临床治疗。因发现其有强效的镇痛作用，目前在
各种疼痛的治疗中得到深入研究和广泛应用。在临床研究中，单剂量硬膜外给药能够减轻
术后疼痛，剖腹产术后的镇痛，顽固性癌症疼痛以及慢性非癌症疼痛。现临床上使用的盐酸
可乐定作为镇痛剂以每天2iig/kg或以上剂量，通过硬膜外或鞘内注射给药，也可与阿片
类镇痛剂联合使用。该药现有片剂、透皮贴剂、水凝胶剂和注射剂等。由于盐酸可乐定生物
半衰期短，临床应用需多次给药，患者的顺应性差，且镇痛作用时间短而影响疗效，尤其是
注射给药可能会带来注射部位的感染等，因此开发其缓释制剂是临床急需的。 脂质体是一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物粉
末或溶液包埋在直径为纳米级的微粒中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主要被网
状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要
在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和
降低药物的毒性。 现有的普通脂质体的制备包括主动载药法和被动载药法两种。其中的主动载药法 也称为遥控包封装载技术，能够将某些特殊性质的药物选择性地扩散，并富集到脂质体内 水相。其基本原理是(l)脂质体磷脂双份子层可以选择性将脂质体内外的水溶性物质，包 括正电荷的质子和钾/钠等各种离子有效地分隔开，形成脂质体内外相对独立的环境；(2) 亲脂性的弱酸或弱碱性化合物在非离子状态呈脂溶性，可以嵌入磷脂双份子层，并依据离 子梯度透过磷脂膜进入脂质体内水相。Nichols和Deamer很早就提出了离子梯度的概念， 他们在早期研究中观察到，如果在脂质体的内外形成PH梯度，且使脂质体内水相为酸性， 能使得儿茶酚胺高效分离并聚集到酸性的脂质体内。相反，当脂质体内水相为碱性时，亲脂 性的弱酸性化合物就会向碱性的脂质体内部聚集。 多囊脂质体是基于脂质体的缓释药物传递系统，被用于局部、区域和系统药物传 递。多囊脂质体还被称为多泡脂质体或多室脂质体，是含有多个非同心腔室的脂质体颗粒， 形状类似于脂质体颗粒，这种颗粒的结构区别于含有多个同心腔室的多室脂质体，又区别 于只含有单个内水相腔室的单室脂质体。许多水溶性药物可包封于多囊脂质体中，通过动
物鞘内、皮下、腹腔和硬膜外给药，人体脑室内、鞘内、皮下、硬膜外给药都显示出了缓释作用。 Kim. S等人于1983年最先发现并研究了多囊脂质体。他们通过复乳溶剂蒸发法， 以磷脂、胆固醇和中性脂质为成膜材料，以氯仿和乙醚为有机溶剂，成功制备了多囊脂质 体，并凭借光学显微镜和电镜观察了多囊脂质体的微观结构。在制备过程中，首先将药物溶 液和脂质相在机械作用力下形成油包水型乳液，再将此乳液与外水相混合制得复乳，然后
4氮气吹干除去有机溶剂而制得多囊脂质体混悬液。 CN ZL95196186. 1也公开了一种活性药剂控制释放的多囊脂质体的制备。因其非 同心圆的拓朴结构，使得多囊脂质体在注射部位形成药物"储库"，随着磷脂双分子层的不 断代谢，包封在囊泡中的药物逐步释放至血液或病变部位，发挥很好的延迟释放作用。通过 调节制备过程中的参数和处方比例，可以轻松控制药物释放时间在几天到数周之间。通过 复乳法制备的多囊脂质体颗粒的平均粒径在5 50ym之间，包封率20% 90%，但是该 多囊脂质体的制备方法药物利用率低，稳定性较差。 现有的多囊脂质体的制备方法均属于上述的被动载药法，而不是主动载药法。本 申请人:的专利申请200610118861. 5公开了一种盐酸可乐定多囊脂质体，但是其也是被动 载药法制备的。该法原料利用率较低，药物利用率通常小于40%。
发明内容
因此，本发明要解决的问题就是提供一种可乐定多囊脂质体及其制备方法。该可
乐定多囊脂质体，包封的活性物质一可乐定的原料利用率高，载药浓度高，稳定性好。 本发明人经过广泛的研究和试验，惊喜地发现用跨膜梯度主动载药法也可以制 备多囊脂质体，而且该方法中可乐定利用率高，多囊脂质体稳定性好，是一种制备可乐定多 囊脂质体的好方法，从而完成了本发明。 因此，本发明解决上述问题所采用的技术方案之一是一种可乐定多囊脂质体，包 括药物活性成分可乐定和空白多囊脂质体作为载体，所述的空白多囊脂质体包括下列质量 份的各组分脂质成分1份和离子梯度调节剂0. 1 50份，其中脂质成分中包括摩尔比为 5 36 : 1的两亲性脂质和中性脂质。 根据本发明，所述的可乐定多囊脂质体中，药脂比较佳的是i : o. i i : 200，更 佳的为i : o.2 i : 20。本发明中，所述的"药脂比"是指药物活性成分可乐定与多囊脂 质体中的脂质成分的质量比。 本发明中，所述的空白多囊脂质体较佳的包括下列质量份的各组分脂质成分1 份和离子梯度调节剂0. 5 20份，其中脂质成分中包括摩尔比10 20 : 1的两亲性脂质
和中性脂质。 本发明中，所述的"两亲性脂质"是指具有亲水和亲油两种性质的类脂成份，主要
是指磷脂，是构成脂质体的主要成份。两亲性脂质较佳的为选自卵磷脂、大豆磷脂、氢化大 豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、硬脂胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、磷脂酰 乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、脑磷脂、鞘磷脂、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂 酰肌醇、磷脂酸和二棕榈酰磷脂酰甘油中的一种或几种。 本发明中，所述的"中性脂质"是指亲油性类脂，本身不能形成脂质体，需与两亲性
脂质一起构成脂质体。中性脂质是形成多囊脂质体拓扑结构的决定性因素之一。其在脂质 体中主要起支架作用，分布于非同心水性腔室磷脂双分子层节点处，支撑起多囊脂质体的 拓扑结构。中性脂质较佳的为选自三油脂、三辛脂、大豆油、猪/牛油脂、生育酚和角鲨烯中 的一种或几种。 本发明中，所述"离子梯度调节剂"是指用于形成脂质体内外离子梯度的物质。所
述的离子梯度调节剂较佳的选自硫酸铵、硫酸铜、硫酸锰、硫酸镁、醋酸钙、柠檬酸和二氯化锰中的一种或几种。 本发明中，所述的脂质成份中，较佳的还可以进一步包括固醇，所述的固醇较佳的 为胆固醇。固醇可通过改变中性脂质相转变温度调节脂质体膜层的流动性，从而改善脂质 体的稳定性和体内体外的释放速率。因此，固醇通常被认为是膜稳定剂。固醇的用量对多 囊脂质体的稳定性和释放行为有显著的影响。本发明中，较佳的，所述的固醇与脂质成分中 的中性脂质的摩尔比为0.7 65 : 1，较佳的为2 8 : l，所述的百分比为其在脂质成分 中所占的摩尔百分比。 本发明中，所述的空白多囊脂质体还进一步包含渗透压调节剂。本发明中，所述的 "渗透压调节剂"是指用于调节溶液渗透压的物质，可为本领域现有技术中常用的物质，如 海藻糖、琥珀酸盐、环糊精、精氨酸、半乳糖、甘露糖、麦芽糖、甘露糖醇、甘氨酸、赖氨酸、拧 檬酸盐、山梨醇和葡聚糖等，较佳的选自葡萄糖、蔗糖、甘露醇和氯化钠中的一种或几种。渗 透压调节剂的含量较佳的为0. 08 15份(相对于脂质成分为1质量份的情况)。
本发明解决上述问题所采用的技术方案之二是一种如上所述的可乐定多囊脂质 体的制备方法，包括以下步骤 ①将脂质成份溶于有机溶剂中作为脂质相，该脂质成分包括两亲性脂质和中性脂 质； ②将离子梯度调节剂溶解于水中，作为内水相，将所述内水相加入脂质相，混合乳 化制得油包水(W/0)型初乳； ③将外水相加入所述油包水型初乳中，混合形成水包油包水(W/0/W)型复乳；
④除去步骤③得到的复乳中的有机溶剂，制得空白多囊脂质体混悬液初品；
⑤用等渗溶液洗涤所述空白多囊脂质体混悬液初品，再分散于等渗溶液中，制得 空白多囊脂质体成品； ⑥将可乐定和渗透压调节剂溶解于水中； ⑦将步骤⑥所得的溶液和步骤⑤所得的空白多囊脂质体成品混合，在高于脂质的 相转变温度孵育，制得可乐定多囊脂质体混悬液初品； ⑧用等渗溶液洗涤所述可乐定多囊脂质体混悬液初品，再分散于等渗溶液中，制 得可乐定多囊脂质体成品。 本发明中，步骤①为将脂质成份溶于有机溶剂中作为脂质相，该脂质成分包括两 亲性脂质和中性脂质。其中，所述的有机溶剂可为能溶解脂质成分的任何溶剂，较佳的为选
自醚、烃、卤代烃、卤代醚和酯中的一种或几种，更佳为氯仿，或者为氯仿和乙醚的混合物。 该脂质相中，较佳的，两亲性脂质的浓度为5 120mM，两亲性脂质和中性脂质的摩尔比为 5 36 : 1。 本发明中，步骤②为将离子梯度调节剂溶解于水中，作为内水相，将所述内水相加 入脂质相，混合乳化制得油包水(W/0)型初乳。 其中，所述离子梯度调节剂选自硫酸铵、硫酸铜、硫酸锰、硫酸镁、醋酸钙、柠檬酸 和二氯化锰中的一种或几种。离子梯度调节剂在内水相中的浓度较佳的为10 1000mM，更 佳的为50 500mM。本发明内水相中的离子梯度调节剂使本发明所得的空白多囊脂质体 内外产生了离子梯度。在主动载药法制备普通脂质体的工艺中，常用的离子梯度包括pH梯 度、硫酸铵梯度和离子梯度_细胞离子载体。硫酸铵梯度法以及其他离子梯度法能够将药
6物载入脂质体内部的最根本原动力都可以归结为pH梯度的作用，只不过pH梯度的产生方 法有直接和间接的区别。本发明所适用的离子梯度也包括如上三种，是通过步骤②所述的 离子梯度调节剂建立的。空白多囊脂质体内外的离子梯度建立后，就可以利用该离子梯度 产生的动力，将药物活性成分可乐定主动载入该空白多囊脂质体中，从而制得可乐定多囊 脂质体。 内水相中可以不含渗透压调节剂，因为离子梯度调节剂本身就可以造成渗透压， 当离子梯度调节剂浓度不够大时，就需要渗透压调节剂来调节渗透压。渗透压调节剂可为 本领域任何常用的用于调节溶液渗透压的物质。渗透压调节剂的作用在于调节内水相的渗 透压等于人体血浆的渗透压，这样可以保证本发明的多囊脂质体被注入人体后保持稳定， 并调节药物自多囊脂质体释放至体内的速率。渗透压调节剂在内水相中的浓度可以为1 1000mM，较佳的为50 200mM。 该步骤②制备油包水(W/0)型初乳的方法为本领域的常规技术，采用选自机械搅 拌、超声和喷雾干燥的方法进行乳化。其中较佳的，所述的内水相和脂质相的体积比较佳的
为i : i i : 4，更佳的为i : i i : 2。 本发明中，步骤③为将外水相加入所述油包水型初乳中，混合形成水包油包水(W/ 0/W)型复乳。其中，较佳的，所述的外水相中包含辅助乳化剂和渗透压调节剂。辅助乳化
剂可以为选自赖氨酸、甘氨酸和组氨酸中的一种或几种。在外水相中，辅助乳化剂浓度较佳
的为20 80mM，更佳的为30 60mM。渗透压调节剂也可以为本领域任何常用的用于调 节溶液渗透压的物质。渗透压调节剂使本发明的空白多囊脂质体的外水相的渗透压保持 与内水相相等，即为人体血浆的渗透压。在该外水相中，渗透压调节剂的浓度较佳的可以为 0. 01 50% (w/v)，更佳的为0. 1 10% (w/v)。该所述的制备水包油包水(W/0/W)型复 乳的方法为本领域的常规技术，采用选自机械搅拌、超声和喷雾干燥的方法进行乳化。所述
的油包水型初乳和外水相的体积比较佳的为i : 2.5 i : io，更佳的为i : 3 i : 5。 本发明中，步骤④为除去步骤③得到的复乳中的有机溶剂，制得空白多囊脂质体
混悬液初品。其中，除去有机溶剂的方法为本领域的常规的溶剂去除法，较佳的为气流吹 干、旋转减压蒸发或喷雾干燥，其中气流吹干法所用气体可选自氮气、氦气、氩气、氧气、氢 气和二氧化碳。 本发明中，步骤⑤为用等渗溶液洗涤所述空白多囊脂质体混悬液初品，再分散于 等渗溶液中，制得空白多囊脂质体成品。本发明中，术语"等渗溶液"是指渗透压与人体血浆 相同的溶液，较佳的为生理盐水。其中洗涤的目的在于去除未包封的离子梯度调节剂和渗 透压调节剂等梯度形成物质，使脂质体内外形成足够大的梯度差，以便更有效地加载药物。
本发明中，步骤⑥为将可乐定和渗透压调节剂溶解于水中。其中，可乐定的浓度较 佳的为0. 05 20mg/ml，更佳的为0. 5 15mg/ml。可乐定产生的渗透压很小，需要加入渗 透压调节剂使该水溶液的渗透压等于空白多囊脂质体的内水相的渗透压。渗透压调节剂的 浓度可以为1 1000mM，较佳为10 500mM，更佳的为20 50mM。 本发明中，步骤⑦为将步骤⑥所得的溶液和步骤⑤所得的空白多囊脂质体成品混 合，在高于脂质的相转变温度孵育，制得可乐定多囊脂质体混悬液初品。其中，所述的空 白多囊脂质体包括下列质量份的各组分脂质成分1份和离子梯度调节剂0. 1 50份， 其中脂质成分中包括摩尔比为5 36 : 1的两亲性脂质和中性脂质。药脂比较佳的为
7i : o. i i : 200，更佳为i : o.2 i : 20。本发明中，术语"脂质的相转变温度"是指 脂质凝胶态和液晶态之间相互转变时的温度。在高于脂质的相转变温度孵育，可以使磷脂 膜通透性增强，使可乐定在离子梯度的驱动力下更易渗透过膜，聚集于多囊脂质体的内水
相中。较佳的，在高于脂质的相转变温度孵育的时间是1 240分钟，更佳的是5 30分钟。 本发明中，步骤⑧为用等渗溶液洗涤所述可乐定多囊脂质体混悬液初品，再分散 于等渗溶液中，制得可乐定多囊脂质体成品。其中，用等渗溶液洗涤的方法可以是本领域 常规的方法，可用等渗溶液作为洗涤溶液，采用离心、透析或膜滤的方法去除其中的游离药 物，然后用等渗溶液悬浮。等渗溶液较佳的为生理盐水。 本发明的可乐定多囊脂质体的给药途径与常规的脂质体一样，如皮下注射、硬膜 外注射或鞘内注射等。 根据本发明，所说的药物活性成分可乐定包括化合物可乐定及其盐。 —切以本发明为基础的可乐定多囊脂质体或以主动载药法制备的可乐定多囊脂
质体以及它们的制备方法都在本发明的范围之内。 相比于现有技术，本发明的有益效果如下本发明采用包封有梯度调节剂的空白 多囊脂质体，通过跨膜梯度主动载药法将可乐定透过磷脂膜进入空白多囊脂质体内水相， 得到了载有药物活性成分可乐定的具有缓释效果的多囊脂质体。本发明包封的活性物 质——可乐定的原料利用率高，可大大较少药物的浪费，从而降低成本。本发明的可乐定多 囊脂质体载药浓度高，药物利用率高，稳定性好，在体内、体外试验中均显示有良好的缓释 作用，从而降低用药次数和用药总量，减少不良反应，必然较现有制剂有更佳的镇痛效果。
以下结合
本发明的特征和优点。
图1是本发明可乐定多囊脂质体体外释放的药时曲线。
具体实施例方式
下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中所用 的原料和试剂均市售可得，未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂 商所建议的条件。 实施例中由摩尔比换算得到的物料的重量投料，由于磷脂多为混合物，故在计算 时取其大约分子量。涉及到的物质的分子量如下卵磷脂750、氢化大豆磷脂790、磷脂酸 424.5、硬脂胺269.5、胆固醇387、三油酸甘油酯885、三辛酸甘油脂470、磷脂酰甘油740、二 棕榈酰磷脂酰甘油745、二油酰磷脂酰胆碱786、二油酰磷脂酰乙醇胺744、磷脂酰肌醇859、 二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸733、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱678、磷脂酰乙醇胺744，鞘磷脂731 。
实施例中所用主要试剂的生产厂商如下卵磷脂，Degussa ;二棕榈酸磷脂酰丝氨 酸，Degussa ;磷脂酰甘油，Degussa ;二棕榈酰磷脂酰甘油，Degussa ;二油酰磷脂酰胆碱， Degussa;可乐定，云南和泰药业有限公司；拧檬酸，中国医药集团上海化学试剂公司；胆固 醇，国药集团化学试剂有限公司；三油酸甘油脂，广州化学试剂厂。
药物利用率测定方法为
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精密量取脂质体混悬液lmL至5mL量瓶中，加生理盐水至刻度，摇匀，得稀释液。精 密量取稀释液lmL至5mL量瓶中，加Triton X-100(10wt% )至刻度，超声15分钟，测定总 药量；另取稀释液适量，600Xg离心10分钟分离上清液，精密量取上清液lmL至5mL量瓶 中，加TritonX-100(10wtX )至刻度，超声15分钟，测定游离药量。按下列公式计算药物利 用率 药物利用率(％ )=(总药量_游离药量)/总药量* 100。
Zeta电位测定方法为 取多囊脂质体混悬液适量，加生理盐水稀释，用ZW380型粒度仪(PCS,光子相关光
谱技术)测定。
实施例1 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入lmL含有19. 8mM(14. 85mg)卵磷月旨， 4. 2mM(3. 13mg) 二棕榈酰磷脂酰甘油，30mM(ll. 61mg)胆固醇和3. 75mM(3. 32mg)三油酸甘 油酯的氯仿溶液。该溶液称为脂质相。 步骤2 :将溶解有120mM(15. 86mg)硫酸铵的水溶液的内水相lmL加入上述盛有脂 质相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌10分钟，得W/0型初乳。
步骤3 :将5mL含有5% (w/v) (250mg)葡萄糖和40mM(29. 36mg)赖氨酸的溶液置 于初乳层上，然后以7500rpm的速度混合10秒钟，得W/O/W型复乳。 步骤4 :将复乳转移至盛有7mL含有5% (w/v) (350mg)葡萄糖和40mM(40. 93mg) 赖氨酸的250mL锥形瓶中，37t:恒温水浴，使8L/min的氮气流通过锥形瓶中的悬液，15分钟 后缓慢挥干氯仿，得空白多囊脂质体初品。 步骤5 :向锥形瓶内加入5倍量的生理盐水，然后600Xg离心10分钟分离脂质 体。弃上清液，并将沉淀物再分散于5mL生理盐水中，再离心沉淀，如此循环操作3次，富集 沉淀，得含有硫酸铵的空白多囊脂质体。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL可乐定(5mg/ml)-葡萄糖(5 % ， w/v) 溶液中，混合均匀，室温(25°C )静置2小时，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50iim ;药物利用率为92. 91%;zeta电位为 负37. 9mV。
实施例2 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入lmL含有5mM(3. 96mg)氢化大豆磷脂， 0. 5mM(0. 38mg) 二棕榈酸磷脂酰丝氨酸，10mM(3. 87mg)胆固醇和O. 155mM(0. 073mg)三辛酸 甘油酯的氯仿-乙醚溶液。该溶液称为脂质相。 步骤2 :将溶解有10mM硫酸锰(0. 845mg)和6% (w/v) (600mg)蔗糖的水溶液内水 相0. 5mL加入上述盛有脂质相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌10分 钟，得W/0型初乳。 步骤3 :将7. 5mL含有0. 5% (w/v) (37. 5mg)甘露醇和80mM(87. 71mg)赖氨酸的溶 液置于初乳层上，然后以4500rpm的速度混合40秒钟，得W/0/W型复乳。
步骤4 :将复乳转移至盛有9mL含有0.5% (w/v) (45mg)甘露醇和80mM (105. 26mg) 赖氨酸的250mL锥形瓶中，37t:恒温水浴，使8L/min的氮气流通过锥形瓶中的悬液，15分钟 后缓慢挥干氯仿_乙醚，得空白多囊脂质体初品。
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步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL含有+A23187(钙离子通道A23187)， 分子量为523. 6，浓度为0. 2mg/ml)、可乐定(15mg/ml)和甘露醇(0. 5%，w/v)水溶液中，混 合均匀，4(TC孵育5分钟，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50 ii m ;药物利用率为78. 44%;zeta电位为 负43mV。 实施例3 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入lmL含有100mM(75mg)卵磷脂，20mM(8. 49mg)磷 脂酸，10mM(3.87mg)胆固醇和13mM(11. 51mg)三油酸甘油酯的二氯甲烷溶液。该溶液称为 脂质相。 步骤2 :将溶解有1000mM(192. lmg)柠檬酸的水溶液内水相lmL加入上述盛有脂 质相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌10分钟，得W/0型初乳。
步骤3 :将20mL含有10% (w/v) (2000mg)甘露醇和20mM(58. 48mg)赖氨酸的溶液 置于初乳层上，然后以7500rpm的速度混合20秒钟，得W/0/W型复乳。
步骤4 :将复乳转移至盛有22mL含有10 % (w/v) (2200mg)甘露醇和 20mM(64. 32mg)赖氨酸的1000mL锥形瓶中，37。C恒温水浴，使8L/min的氮气流通过锥形瓶 中的悬液，15分钟后缓慢挥干二氯甲烷，得空白多囊脂质体初品。
步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL可乐定(7. 5mg/ml)_甘露醇(10%， w/V)水溶液中，混合均匀，4t:孵育120分钟，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50 ii m ;药物利用率为95. 83%;zeta电位为 负55. lmV。
实施例4 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入O. 5mL含有25mM(9.83mg) 二棕榈酰磷脂酰 胆碱，10mM(8. 59mg)磷脂酰肌醇，5mM(0. 97mg)胆固醇、1.2mM(0. 53mg)三油酸甘油酯和 1.2mM(0.28mg)三辛酸甘油酯的氯仿-乙醚(1 : 1)溶液。该溶液称为脂质相。
步骤2 :将溶解有350mM(23. 12mg)硫酸铵的水溶液内水相0. 5mL加入上述盛有脂 质相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌10分钟，得W/0型初乳。
步骤3 :将2. 5mL含有8% (w/v) (200mg)蔗糖和60mM(21. 48mg)赖氨酸的溶液置 于初乳层上，然后以7500rpm的速度混合10秒钟，得W/0/W型复乳。 步骤4 :将复乳转移至盛有2. 5mL含有8% (w/v) (200mg)蔗糖和60mM(21. 48mg) 赖氨酸的250mL锥形瓶中，37t:恒温水浴，使8L/min的氮气流通过锥形瓶中的悬液，15分钟 后缓慢挥干氯仿_乙醚有机溶剂，得空白多囊脂质体初品。
步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL可乐定(20mg/ml)-蔗糖(8%， w/v) 水溶液中，混合均匀，6(TC孵育30分钟，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50 ii m ;药物利用率为87. 49%;zeta电位为 负52. 5mV。
实施例5
步骤1 :在干净的玻璃容器中加入2mL含有50mM(75mg)大豆磷脂，5mM(2. 7mg)硬 脂胺，50mM(38. 7mg)胆固醇和8. 4mM(7. 9mg)三辛酸甘油酯的氯仿溶液。该溶液称为脂质 相。 步骤2 :将溶解有150mM(18. 7mg)硫酸铜和葡萄糖2% (w/v) (10mg)的水溶液内水 相0. 5mL加入上述盛有脂质相的玻璃容器中，用高速剪切机以13， OOOrpm的速度搅拌10分 钟，得W/0型初乳。 步骤3 :将20mL含有0. 9% (w/v) (180mg)氯化钠禾口 40mM(116. 96mg)赖氨酸的溶
液置于初乳层上，然后以7500rpm的速度混合10秒钟，得W/0/W型复乳。 步骤4 :将复乳转移至盛有20mL含有0. 9 % (w/v) (180mg)氯化钠和
40mM(116. 95mg)赖氨酸的1000mL锥形瓶中，37。C恒温水浴，使8L/min的氮气流通过锥形瓶
中的悬液，15分钟后缓慢挥干氯仿有机溶剂，得空白多囊脂质体初品。 步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL可乐定(15mg/ml)-氯化钠(0. 9%， w/V)水溶液中，混合均匀，3(TC孵育10分钟，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50 ii m ;药物利用率为91. 82%;zeta电位为 负35. 5mV。
实施例6 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入0. 5mL含有5mM(1. 97mg) 二油酰磷脂酰胆碱， lmM(O. 73mg) 二棕榈酰磷脂酰丝氨酸，0. 625mM(0. 12mg)胆固醇和0. 27mM(0. 16mg)大豆油 的氯仿-乙醚(l : l)溶液。该溶液称为脂质相。 步骤2 :将溶解有600mM(37. 77mg) 二氯化锰的水溶液内水相0. 5mL加入上述盛有 脂质相的玻璃容器中，用高速剪切机以13， OOOrpm的速度搅拌10分钟，得W/0型初乳。
步骤3 :将5mL含有3. 5% (w/v) (175mg)葡萄糖和60mM(43. 86mg)赖氨酸的溶液 置于初乳层上，然后以7500rpm的速度混合10秒钟，得W/0/W型复乳。
步骤4 :将复乳转移至盛有5mL含有3.5% (w/v) (175mg)葡萄糖和60mM (43. 86mg) 赖氨酸的250mL锥形瓶中，37t:恒温水浴，使8L/min的氮气流通过锥形瓶中的悬液，15分钟 后缓慢挥干氯仿_乙醚有机溶剂，得空白多囊脂质体初品。
步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL含有+A23187 (0. 2mg/ml)、可乐定 (5mg/ml)-葡萄糖(3.5%，w/v)水溶液中，混合均匀，55。C孵育60分钟，得可乐定多囊脂质 体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50iim ;药物利用率为64. 31%;zeta电位为 负28. 7mV。
实施例7 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入lmL含有20mM(15mg)卵磷脂，20mM(7. 74mg)胆 固醇和2.4mM(1.45mg)大豆油的氯仿溶液。该溶液称为脂质相。 步骤2 :将溶解有125mM(16. 52mg)硫酸铵的水溶液内水相lmL加入上述盛有脂质
相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌10分钟，得W/0型初乳。 步骤3 :将5mL含有5. 4% (w/v)葡萄糖(270mg)和40mM(29. 24mg)赖氨酸的溶液置于初乳层上，然后以10， OOOrpm的速度混合10秒钟，得W/O/W型复乳。 步骤4 :将复乳转移至盛有5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和40mM(29. 24mg)
赖氨酸溶液的250mL锥形瓶中，37t:恒温水浴，使8L/min的氮气流通过锥形瓶中的悬液，15
分钟后缓慢挥干氯仿，得空白多囊脂质体初品。
步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL含有可乐定(10mg/ml)生理盐水溶 液中，混合均匀，25t:孵育5分钟，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50 ii m ;药物利用率为80. 59%;zeta电位为 负13mV。 实施例8 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入lmL含有3mM(2mg) 二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱， 2mM(1.49mg)磷脂酰乙醇胺，9mM(7. 9mg)胆固醇和lmM(O. 89mg)三油酸甘油酯的环己烷溶 液。该溶液称为脂质相。 步骤2 :将溶解有250mM(4. 4mg)醋酸f丐和8. 5% (w/v) (85mg)蔗糖的水溶液内水
相lmL加入上述盛有脂质相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌10分
钟，得W/0型初乳。 步骤3:同实施例1。 步骤4:同实施例1。 步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL可乐定(0. 5mg/ml)-葡萄糖(5.4%， w/V)水溶液中，混合均匀，4t:孵育120分钟，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50iim ;药物利用率为99. 03%;Zeta电位为 负36. 8mV。
实施例9 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入lmL含有45mM(33. 5mg) 二油酰磷脂酰乙醇胺， 40mM(30mg)脑磷脂，9mM(3. 5mg)胆固醇和5mM(4. 4mg)三油酸甘油酯的氯代甲醚溶液。该 溶液称为脂质相。 步骤2 :将溶解有400mM(48mg)硫酸镁和6. 2% (w/v) (62mg)蔗糖的水溶液内水相 lmL加入上述盛有脂质相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌IO分钟，得 W/0型初乳。 步骤3:同实施例1。
步骤4:同实施例1。
步骤5:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL可乐定(lmg/ml)-葡萄糖(5.4%，w/ v)水溶液中，混合均匀，4t:孵育120分钟，得可乐定多囊脂质体。 测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50 ii m ;药物利用率为98. 75%;zeta电位为 负64mV。 实施例10 步骤1 :在干净的玻璃容器中加入lmL含有20mM(14. 6mg)鞘磷脂，10rnM(7. 4mg)磷脂酰甘油，50mM(19.3mg)胆固醇和2mM(1. 77mg)三油酸甘油酯的乙酸乙酯溶液。该溶液称 为脂质相。 步骤2 :将溶解有120mM(15. 86mg)硫酸铵的水溶液的内水相lmL加入上述盛有脂 质相的玻璃容器中，用高速剪切机以10， OOOrpm的速度搅拌10分钟，得W/0型初乳。
步骤3:同实施例1。
步骤4:同实施例1。 步骤6 :将空白多囊脂质体沉淀再分散于5mL可乐定(0. 05mg/ml)-葡萄糖 (5. 4%， w/v)水溶液中，混合均匀，4t:孵育120分钟，得可乐定多囊脂质体。
测得可乐定多囊脂质体的粒径为5 50 ii m ;药物利用率为99. 81%;zeta电位为 负51. 2mV。 对比例1主动载药法制备可乐定普通脂质体 在茄形瓶中，加入含有400mM卵磷脂，40mM胆固醇的氯仿溶液10ml。 55。C恒温旋 蒸除去其中的氯仿，使成磷脂膜。缓慢加入55t:的250mM的硫酸铵溶液10ml，涡旋振荡30 分钟，使磷脂膜完全脱落。然后在55t:恒温超声30分钟，制备得到空白脂质体。将所得空 白脂质体依次通过0. 8、0. 45和0. 22 ii m微孔滤膜，进行整粒。将整粒后的脂质体透析，除 去游离硫酸铵，透析液为生理盐水。再加入lml的可乐定(10mg/ml)-葡萄糖(5%，w/v)水 溶液的，置于55t:恒温水浴中孵化5分钟，即可得到可乐定的普通脂质体。
测得可乐定普通脂质体的粒径为100 150nm ;药物利用率为87. 55%;zeta电位 为负47mV。 试验实施例1 (1)可乐定多囊脂质体的体外释放测定 精密量取实施例1的可乐定多囊脂质体混悬液5ml，用20ml生理盐水稀释，将所得 混悬液置于37t:恒温摇床(转速为15rpm)中，在预定的时间点取出等量的样品，以600Xg 离心分离上清液和沉淀，依法测定上清液中可乐定的量。每个时间点的药物释放百分比用 以下公式计算 药物释放百分比(％ )=上清液中游离可乐定的量/多泡脂质体中包封的可乐定 原始量X 100 (2)可乐定普通脂质体的体外释放测定 精密量取对比例1的可乐定普通脂质体lml至经预处理的透析袋(截留分子量为 1， 4000)中，置于装有50mL生理盐水的烧杯中，37。C恒温搅拌，定时取样lmL生理盐水透析 液，同时补充等量的生理盐水，依法测定样品溶液中可乐定的量。并按如上方法计算释放百 分比。 结果普通脂质体在6小时左右药物释放超过90%，而多囊脂质体在第3天(72小 时)时，药物释放才达到90%以上，包封的可乐定基本释放完全(如图l所示)。说明本发 明可乐定多囊脂质体与普通脂质体相比，具有明显的缓释效果。
权利要求
一种可乐定多囊脂质体，其特征在于，包括药物活性成分可乐定和空白多囊脂质体作为载体，所述的空白多囊脂质体包括下列质量份的各组分脂质成分1份和离子梯度调节剂0.1～50份，其中脂质成分中包括摩尔比为5～36∶1的两亲性脂质和中性脂质。
2. 如权利要求i所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，其中药脂比是i : o. i i : 200。
3. 如权利要求1所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的空白多囊脂质体包括 下列质量份的各组分脂质成分1份和离子梯度调节剂0. 5 20份，其中脂质成分中包括摩尔比i0 20 : i的两亲性脂质和中性脂质。
4. 如权利要求1所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的两亲性脂质为选自卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、硬脂胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二 油酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、脑磷脂、鞘磷脂、二棕榈酰磷脂酰丝 氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸和二棕榈酰磷脂酰甘油中的一种或几种。
5. 如权利要求1所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的中性脂质为选自三油脂、三辛脂和大豆油中的一种或几种。
6. 如权利要求1所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的离子梯度调节剂选自 硫酸铵、硫酸铜、硫酸锰、硫酸镁、醋酸钙、柠檬酸和二氯化锰中的一种或几种。
7. 如权利要求1所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的脂质成份中，还进一步 包括固醇。
8. 如权利要求7所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的固醇为胆固醇。
9. 如权利要求7所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的固醇与脂质成分中的 中性脂质的摩尔比为0.7 65 : 1。
10. 如权利要求1所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，还包含渗透压调节剂。
11. 如权利要求10所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，渗透压调节剂的含量为 0. 08 15份。
12. 如权利要求10所述的可乐定多囊脂质体，其特征在于，所述的渗透压调节剂选自 葡萄糖、蔗糖、甘露醇、氯化钠、海藻糖、琥珀酸盐、环糊精、精氨酸、半乳糖、甘露糖、麦芽糖、 甘露糖醇、甘氨酸、赖氨酸、柠檬酸盐、山梨醇和葡聚糖中的一种或几种。
13. —种如权利要求1 12任一项所述可乐定多囊脂质体的制备方法，其特征在于，包 括以下步骤① 将脂质成份溶于有机溶剂中作为脂质相，该脂质成分包括两亲性脂质和中性脂质；② 将离子梯度调节剂溶解于水中，作为内水相，将所述内水相加入脂质相，混合乳化制 得油包水(W/0)型初乳；③ 将外水相加入所述油包水型初乳中，混合形成水包油包水(W/0/W)型复乳；④ 除去步骤③得到的复乳中的有机溶剂，制得空白多囊脂质体混悬液初品；⑤ 用等渗溶液洗涤所述空白多囊脂质体混悬液初品，再分散于等渗溶液中，制得空白 多囊脂质体成品；⑥ 将可乐定和渗透压调节剂溶解于水中；⑦ 将步骤⑥所得的溶液和步骤⑤所得的空白多囊脂质体成品混合，在高于脂质的相转 变温度孵育，制得可乐定多囊脂质体混悬液初品；⑧用等渗溶液洗涤所述可乐定多囊脂质体混悬液初品，再分散于等渗溶液中，制得可 乐定多囊脂质体成品。
14. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤①所述的有机溶剂为选自醚、 烃、卤代烃、卤代醚和酯中的一种或几种。
15. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤①所述的脂质相中，两亲性脂质 的浓度为5 120mM，两亲性脂质和中性脂质的摩尔比为5 36 : 1。
16. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤②所述的离子梯度调节剂在内 水相中的浓度为10 1000mM。
17. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤②所述的内水相中还加入渗透 压调节剂，然后才将所述内水相加入脂质相，混合乳化制得油包水(W/0)型初乳。
18. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤②所述的内水相和脂质相的体积比为i : i i : 4。
19. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤③所述的外水相中包含辅助乳 化剂和渗透压调节剂，辅助乳化剂选自赖氨酸、甘氨酸和组氨酸中的一种或几种。
20. 如权利要求19所述的制备方法，其特征在于，所述的外水相中的辅助乳化剂浓度 为20 80mM。
21. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤③所述的油包水型初乳和外水 相的体积比为1 : 2. 5 1 : 10。
22. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤⑤和步骤⑧所述的等渗溶液为 生理盐水。
23. 如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤⑥中所述的可乐定的浓度为 0.05 20mg/ml。
全文摘要
本发明公开了一种可乐定多囊脂质体及其制备方法。该可乐定多囊脂质体，包括药物活性成分可乐定和空白多囊脂质体作为载体，所述的空白多囊脂质体包括下列质量份的各组分脂质成分1份和离子梯度调节剂0.1～50份，其中脂质成分中包括摩尔比为5～36∶1的两亲性脂质和中性脂质。本发明采用包封有梯度调节剂的空白多囊脂质体，通过跨膜梯度主动载药法将可乐定透过磷脂膜进入空白多囊脂质体内水相，得到了可乐定的多囊脂质体。本发明原料利用率高，载药浓度高，在体内、体外试验中均显示有良好的缓释作用，具有更佳的镇痛效果。
文档编号A61K9/127GK101756902SQ20081020764
公开日2010年6月30日 申请日期2008年12月23日 优先权日2008年12月23日
发明者李军, 杨耀杰, 王莉莉, 虞丽芳, 陆伟根, 陈亭亭 申请人:上海医药工业研究院