一种治疗由PRRSV、PCV‑2感染引起猪呼吸道疾病的血清制备方法与流程

本发明涉及免疫血清制备方法，具体涉及一种治疗由PRRSV、PCV-2感染引起猪呼吸道疾病的血清制备方法。
背景技术：
：近年来呼吸道疾病已成为各大养猪场最常见、危害最严重的疾病之一，随着集约化高密度养殖，猪场环境很难控制，导致大部分养猪场所养的猪大都遭受着呼吸系统疾病的侵害，目前，猪呼吸系统疾病已成为我国许多规模化猪场和农村养猪大户十分关注的问题，些疾病主要有：猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪瘟、猪气喘病、猪传染性胸膜肺炎、猪传染性萎缩性鼻炎、猪链球菌病、猪肺疫、猪流行性感冒等。这些疾病在临床症状上易于被混淆，诊疗不当常导致猪的大批死亡，给猪场造成严重的经济损失。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种治疗由PRRSV、PCV-2感染引起猪呼吸道疾病的血清制备方法。本发明采用的技术方案为，一种治疗由PRRSV、PCV-2感染引起猪呼吸道疾病的血清制备方法，包括以下步骤：（1）从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪，饲养于消毒后的饲养室中，饲养期间，每天灌喂垂盆草酶解提取物，灌喂量为50mg/kg，连续灌喂15天；（2）仔猪长至35日龄时，通过鼻粘膜接种1mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.2mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；（3）接种后持续观察15天，淘汰病猪，保留未发病的猪只，每天灌喂垂盆草酶解提取物，灌喂量为80mg/kg，连续灌喂15天；（4）仔猪长至70日龄时，通过鼻粘膜接种2mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.4mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；接种后持续观察15天，淘汰病猪，保留未发病的猪只，对未发病猪只剖杀放血，分离血清，经无菌检测及生物学安全检测后，按3-5ml/每支分装入容器中，4℃保存。其中，饲养期间，每隔1天对饲养室消毒一次。其中，所述垂盆草酶解提取物制作方法为，将粉碎的垂盆草浸泡在加有纤维素酶、果胶酶的50%乙醇中，在40-45℃、pH值等于5.5的条件下进行酶解提取，所述酶解提取时间为8-10小时；50%乙醇用量为垂盆草重量的8-10倍；纤维素酶的用量为2-3mg/g垂盆草；果胶酶的用量为2-3mg/g垂盆草。在确诊猪由PRRSV、PCV-2感染呼吸道疾病后，对病猪腹腔注射5ml/头本发明所得到的治疗猪呼吸道疾病的血清，具有显著的治疗效果，在仔猪断奶前一周腹腔注射3ml/头，有显著的预防效果。本发明在仔猪生长期间通过向仔猪灌喂垂盆草酶解物，能有效提高仔猪抗PRRSV、PCV-2感染的能力，仔猪经2次攻毒后，血清内抗PRRSV、PCV-2抗体含量极高。附图说明图1为本发明对照试验中，实验组和对照组猪只ELISA抗体动态变化图。具体实施方式实施例1、从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪50头，饲养于消毒后的饲养室中，饲喂常规配制得到的全价日粮，全价日粮中不掺加任何抗病毒或抗生素类成分，饲养期间，每天灌喂垂盆草酶解提取物，灌喂量为50mg/kg，连续灌喂15天；仔猪长至35日龄时，通过鼻粘膜接种1mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.2mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；接种后持续观察15天，仅有一只猪出现感染症状，表现为咳嗽、呼吸困难、食欲减退，保留剩余49只未发病的猪只，每天灌喂垂盆草酶解提取物，灌喂量为80mg/kg，连续灌喂15天；仔猪长至70日龄时，通过鼻粘膜接种2mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.4mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；接种后持续观察15天，淘汰病猪，保留剩余49只未发病的猪只，随机从未发病猪只中挑选5头剖杀放血，分离血清，经无菌检测及生物学安全检测后，按3-5ml/每支分装入容器中，4℃保存，得到治疗由PRRSV、PCV-2感染引起猪呼吸道疾病的血清。其中，饲养期间，每隔1天对饲养室消毒一次。其中，所述垂盆草酶解提取物制作方法为，将粉碎的垂盆草浸泡在加有纤维素酶、果胶酶的50%乙醇中，在40℃、pH值等于5.5的条件下进行酶解提取，所述酶解提取时间为8小时；50%乙醇用量为垂盆草重量的8倍；纤维素酶的用量为2mg/g垂盆草；果胶酶的用量为2mg/g垂盆草。将上述得到的治疗由PRRSV、PCV-2感染引起猪呼吸道疾病的血清用于预防和治疗猪PRRSV、PCV-2感染导致的呼吸道疾病。治疗试验：2015年4月20日，长丰县水家湖某猪场购进仔猪300头，均重17.51kg，随机将仔猪等分为A、B两组并人工标记，对A组猪只腹腔注射3ml/头由实施例1得到的治疗猪支原体肺炎的血清后，将A、B两组猪混合饲养；饲养期间B组猪只中有28头仔猪于7月2号开始发病，至7月13日确诊有猪PRRSV、PCV-2感染感染，将确诊病猪隔离治疗，治疗期间仍按之前相同饲养方法饲喂，对病猪腹腔注射5ml/头由实施例1得到的治疗猪PRRSV、PCV-2感染的血清，每天注射一次，连续注射3天，隔离治疗期间，每天早、中、晚仔细观察猪只的临床症状，根据治疗效果分为有效和无效，注射3天后，已出现临床症状的猪，症状完全消失或在停药后15天内没有新的病猪出现，判定为有效，用药6天，原来出现临床症状的猪仍有明显临床症状或死亡，停药15天后又复发判定为无效。试验结果：组别有效率（%）A100%饲养期间，A组猪只未见有猪支原体感染病猪出现。以下结合具体对照试验对本发明进一步说明：其中，实验组从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪100头，饲养于消毒后的饲养室中，饲喂常规配制得到的全价日粮，全价日粮中不掺加任何抗病毒或抗生素类成分，饲养期间，每天灌喂垂盆草酶解提取物，灌喂量为50mg/kg，连续灌喂15天；仔猪长至35日龄时，通过鼻粘膜接种1mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.2mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；接种后持续观察15天，仅有1只猪出现感染症状，表现为咳嗽、呼吸困难、食欲减退，保留剩余99只未发病的猪只，每天灌喂垂盆草酶解提取物，灌喂量为80mg/kg，连续灌喂15天；仔猪长至70日龄时，通过鼻粘膜接种2mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.4mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；接种后持续观察15天，淘汰病猪，保留剩余99只未发病的猪只，随机从未发病猪只中挑选5头剖杀放血，分离血清，经无菌检测及生物学安全检测后，按3-5ml/每支分装入容器中，4℃保存，得到治疗由PRRSV、PCV-2感染引起猪呼吸道疾病的血清。其中，饲养期间，每隔1天对饲养室消毒一次。其中，所述垂盆草酶解提取物制作方法为，将粉碎的垂盆草浸泡在加有纤维素酶、果胶酶的50%乙醇中，在40℃、pH值等于5.5的条件下进行酶解提取，所述酶解提取时间为8小时；50%乙醇用量为垂盆草重量的8倍；纤维素酶的用量为2mg/g垂盆草；果胶酶的用量为2mg/g垂盆草。对照组从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪100头，饲养于消毒后的饲养室中，饲喂常规配制得到的全价日粮，全价日粮中不掺加任何抗病毒或抗生素类成分；仔猪长至35日龄时，通过鼻粘膜接种1mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.2mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；接种后持续观察15天，有90只猪出现感染症状，表现为咳嗽、呼吸困难、食欲减退，保留剩余10只未发病的猪只；仔猪长至70日龄时，通过鼻粘膜接种2mLPRRSVMN-184毒株，剂量为每头2×104TCID50；肌注接种0.4mLPCV-2毒株，剂量为每头2×104.5TCID50；接种后持续观察15天，有6只猪发病，淘汰病猪，保留剩余4只未发病的猪只。其中，饲养期间，每隔1天对饲养室消毒一次。实验组和对照组试验期间，分别于第15天、30天、35天、50天、65天、70天、85天对未淘汰猪只采血，用间接ELISA测定猪PRRSV抗体；结果见图1。当前第1页1 2 3