本发明属于医用、牙科用或梳妆用的配制品技术领域，特别涉及一种在胃肠道稳定的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂及制备方法。
背景技术：
神经节苷脂是一族异构的含唾液酸的结构复杂的膜糖脂质，最早由Klenk于1939年发现。其分子皆由含有一个亲脂的神经酰胺部分和一个亲水的唾液酸寡糖核心基团组成。自1976年Ceccarelli首次证明外源神经节苷脂(Ls)能提高周围神经再生，促进修复以来，国内外学者对神经节苷脂对中枢神经系统的作用进行了深入地研究。单唾液酸四己糖神经节苷脂(M1)是神经节苷脂中具有神经营养及中枢神经系统修复等多种生物学作用的重要一类，其在神经系统损伤治疗中的作用正受到广泛重视。
M1分子由含有亲脂的神经酰胺部分和一个亲水的唾液酸寡糖基团两部分组成的两性分子，因而具有水溶性和脂溶性两种特性，可通过血脑屏障，集中嵌入损伤的神经细胞膜上。
根据国内外的研究，M1具有以下作用机理：(1)M1可减少神经组织损伤后Ca2+离子内流，降低磷脂酶A2的活性，减少自由基形成，保护膜结构和功能。(2)脑外伤后脑细胞蛋白激酶C活性增高，使细胞核、胞浆中蛋白质及构成细胞骨架的膜蛋白代谢障碍，而M1能抑制蛋白激酶C活性，维持细胞结构完整性。(3)M1能修复内膜电子传递链损伤，提高ADP/ATP转位酶、ATP合成酶活性，ATP产生增多，明显改善线粒体氧化磷酸化作用，修复脑线粒体呼吸功能。(4)M1能保护膜钠泵、钙泵活性，降低膜通透性，维持膜内外离子平衡。(5)M1具有刺激神经元轴索芽生并能促进再生的功能。对因多巴胺神经元损害引起的继发性退行性病变有保护作用，能提高多巴胺神经元的存活。(6)M1能浓聚神经生长因子并转给神经生长因子特异性受体，促进轴突发芽、再生神经纤维发育成熟和神经功能恢复。正是基于以上作用机理，M1具有诸多优良的药理作用。国内外大量的研究结果表明，单唾液酸四己糖神经节苷脂(M1)在神经细胞的分化、发育、神经元的可塑性、突触的传递和对增加创伤后的神经细胞的树突生成，提高其存活率，参与不同神经的多种修复及诱导神经再生以及神经系统创伤后的功能恢复具有极其重要的作用。
药理、药效及药代动力学研究表明，M1对于各种动物模型包括创伤性引起的中枢神经系统损伤，缺血或出血引起的血管性神经损伤都具有明显的修复作用。动物实验显示M1可显著改善帕金森病所致的行为障碍。临床研究观察到本品对创伤和脑血管意外引起的中枢神经损伤以及帕金森氏病有治疗作用，除少数患者出现皮疹样反应外，很少出现毒副作用。M1具有水溶性和脂溶性两种特性，是唯一能通过血脑屏障的神经节苷脂，因此只有M1才能用于中枢神经系统病变的治疗。这些研究均表明M1在神经损伤治疗中毫无疑问的有着极好的临床应用前景。
因此自上世纪八十年代起，国外对M1在治疗各种原因引起的中枢神经损伤方面的疗效以及帕金森氏病进行了广泛的试验研究和临床评价，目前已在意大利(1986年)、巴西(1991年)、阿根廷(1991年)、希腊(1992年)、新加坡(1997年)等国家批准临床应用，用于脑血管疾病、神经源性疼痛、奥本海默氏病、帕金森氏病、中枢神经系统外伤等多种神经疾病，其中对于治疗脑率中、帕金森氏病和急性脊髓损伤最为显著，显示出良好的疗效。我国在上世纪九十年代末批准了M1注射液的进口和临床应用，但进口产品价格昂贵，极大的加重了国内患者的经济负担，也进一步加大了医患关系的紧张，不利于社会的长治久安，因此国产M1产品的上市成为了一种迫切期待。自2005年齐鲁制药首先获得M1注射液的国产生产批文以来，国内至今仅有少量厂家获得M1原料和(或)制剂的生产批文。
并且当前在国内外上市的制剂均为单唾液酸四己糖神经节苷脂钠盐的注射剂，该钠盐注射剂存在给药不方便、不良反应多、患者耐受性差、临床风险高等不足，亟需开发口服给药剂型。
目前关于多单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的口服制剂研究较少，仅有CN104490837公开的一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的口服制剂；单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃肠道不稳定(在胃肠道极易分解)，口服后在胃肠道微生物及水解酶的分解作用下迅速丧失药理作用，无法发挥疗效，现有技术公开的口服制剂仍无法解决单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃肠道不稳定的技术问题。。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃肠道的稳定性，并使其能持续发挥药理作用，本发明提供一种全新组分且在胃肠道稳定的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂及其制备方法。
本发明具体技术方案如下：
本发明提供一种在胃肠道稳定的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂，该口服制剂为片剂或胶囊，其主要由下列重量份数的组分组成：
本发明提供的口服制剂能够保证单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃肠道具有很好的稳定性，本发明在口服制剂中加入聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶、磷脂酰肌氨酸和羟丙基淀粉混合物在单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的结构外层形成一层凝胶保护层，将单唾液酸四己糖神经节苷脂钠很好地包裹在凝胶层内，进而起到稳定单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的作用。
进一步的改进，该口服制剂还包括如下重量份数的组分：
十二烷基酰胺甜菜碱 1-3
木质素 0.5-1
三聚磷酸钠 0.5-1。
本发明进一步在口服制剂中加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠，不但能够促进单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的释放，还能够提高聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶、磷脂酰肌氨酸和羟丙基淀粉混合物对单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的包封率，同时具有吸湿的作用，进一步提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃肠道的稳定性。
进一步的改进，该口服制剂还包括重量份数为1-3.5份的崩解剂和2-5份的粘合剂。
优选地，崩解剂是重量份数比为0.5∶2∶1的甘氨酸、月桂醇硫酸酯钠和微晶纤维素的混合物。
本发明选择甘氨酸、月桂醇硫酸酯钠和微晶纤维素的混合物作为崩解剂可以提高口服制剂中单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的崩解时限，可使其在10min内崩解。
优选地，粘合剂是重量份数比为0.2∶0.5∶0.3的普鲁兰、萜烯树脂和泊洛沙姆的混合物。
本发明选择普鲁兰、萜烯树脂和泊洛沙姆的混合物作为粘合剂可以显著提高粘合效果，并且使片剂具有更适合的硬度和脆碎度。
优选地，所述口服制剂还包0.5-1.3份的润滑剂，优选地，润滑剂是重量份数比为1∶0.3的双磷脂酰甘油和磷酸钙的混合物。
选择双磷脂酰甘油和磷酸钙的混合物作为润滑剂可以显著提高混合粉的流动性，利于压片，并且不会影响片剂的崩解时限。
进一步的改进，该口服制剂为外层包裹薄膜包衣的口服制剂，优选为薄膜包衣片剂。
进一步的改进，用于制备薄膜包衣的薄膜包衣液主要由如下重量份数的组分制备而成：
由本发明提供的薄膜包衣液制备的薄膜包衣可以显著提高口服制剂的稳定性，使其在胃内不发挥作用，在肠道内发挥作用，进而降低单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃内的降解。
本发明另一方面提供一种在胃肠道稳定的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
S1：将聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶与羟丙基淀粉，研磨均匀，制得研磨物，将研磨物按重量份数比为1∶0.5的量加入到浓度为75％乙醇水溶液中，搅拌均匀，制得混合液，依次向混合液中加入磷脂酰肌氨酸和单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，高速剪切乳化，制得乳化液；
S2：向乳化液中加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠混合均匀，喷雾干燥制得混合粉；
S3：将混合粉与崩解剂和粘合剂，混合均匀，过20目筛，制粒；
S4：将步骤S3制得的片剂与润滑剂混合均匀，整粒，压片或装入胶囊壳中。
由本发明提供的方法制备的口服制剂在胃肠内性质更加稳定。
进一步的改进，本发明还提供了薄膜包衣口服制剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
S11：制备口服制剂；
S12：将聚乙烯缩乙醛二乙胺醋酸酯、季戊四醇邻苯二甲酸酯和甘油三醋酸酯和聚乙二醇400溶于浓度为80％乙醇水溶液中，搅拌均匀，滤过，制得薄膜包衣液；
S13：将口服制剂放入包衣锅内，喷入一定量的薄膜包衣液，使口服制剂表面均匀湿润，冷冻干燥，蒸发溶剂；
S14：反复步骤S13的操作，使薄膜包衣增重1-4％，冷冻干燥，除尽残余溶剂，制得薄膜包衣口服制剂。
本发明所提供的制备方法简单，制得的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂含量均匀度高，性质稳定，适合工业化生产。
本发明所提供的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂具有很好的稳定性，并通过与聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶、磷脂酰肌氨酸和羟丙基淀粉混合物制成口服制剂后，降低了单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃内的降解，制成了一层保护层，使单唾液酸四己糖神经节苷脂钠包裹在保护层内，提高其在胃内的稳定性，进而提高整个口服制剂的稳定性，使其能够充分地发挥药效。
具体实施方式
实施例1
实施例2
制备方法：
S1：将聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶与羟丙基淀粉，研磨均匀，制得研磨物，将研磨物按重量份数比为1∶0.5的量加入到浓度为75％乙醇水溶液中，搅拌均匀，制得混合液，依次向混合液中加入磷脂酰肌氨酸和单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，高速剪切乳化，制得乳化液，过20目筛，制粒，压片。
实施例3
实施例4
制备方法：
S1：将聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶与羟丙基淀粉，研磨均匀，制得研磨物，将研磨物按重量份数比为1∶0.5的量加入到浓度为75％乙醇水溶液中，搅拌均匀，制得混合液，依次向混合液中加入磷脂酰肌氨酸和单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，高速剪切乳化，制得乳化液；
S2：向乳化液中加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠混合均匀，喷雾干燥制得混合粉，过20目筛，制粒，压片。
实施例5
制备方法：
S1：将聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶与羟丙基淀粉，研磨均匀，制得研磨物，将研磨物按重量份数比为1∶0.5的量加入到浓度为75％乙醇水溶液中，搅拌均匀，制得混合液，依次向混合液中加入磷脂酰肌氨酸和单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，高速剪切乳化，制得乳化液，喷雾干燥制得混合粉；
S2：将混合粉与甘氨酸、月桂醇硫酸酯钠和微晶纤维素、普鲁兰、萜烯树脂和泊洛沙姆，混合均匀，过20目筛，制粒；
S3：将步骤S2制得的片剂装入胶囊壳中。
实施例6
制备方法：按实施例5的方法制备。
实施例7
制备方法：
S1：将聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶与羟丙基淀粉，研磨均匀，制得研磨物，将研磨物按重量份数比为1∶0.5的量加入到浓度为75％乙醇水溶液中，搅拌均匀，制得混合液，依次向混合液中加入磷脂酰肌氨酸和单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，高速剪切乳化，制得乳化液，喷雾干燥制得混合粉；
S2：将混合粉与甘氨酸、月桂醇硫酸酯钠和微晶纤维素、普鲁兰、萜烯树脂和泊洛沙姆，混合均匀，过20目筛，制粒；
S3：将步骤S2制得的片剂与双磷脂酰甘油和磷酸钙混合均匀，整粒，压片。
实施例8
制备方法：按实施例7的方法制备。
实施例9
制备方法：
S1：将聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶与羟丙基淀粉，研磨均匀，制得研磨物，将研磨物按重量份数比为1∶0.5的量加入到浓度为75％乙醇水溶液中，搅拌均匀，制得混合液，依次向混合液中加入磷脂酰肌氨酸和单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，高速剪切乳化，制得乳化液；
S2：向乳化液中加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠混合均匀，喷雾干燥制得混合粉；
S3：将混合粉与崩解剂和粘合剂，混合均匀，过20目筛，制粒；
S4：将步骤S3制得的片剂，压片。
实施例10
制备方法：
S1：将聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶与羟丙基淀粉，研磨均匀，制得研磨物，将研磨物按重量份数比为1∶0.5的量加入到浓度为75％乙醇水溶液中，搅拌均匀，制得混合液，依次向混合液中加入磷脂酰肌氨酸和单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，高速剪切乳化，制得乳化液；
S2：向乳化液中加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠混合均匀，喷雾干燥制得混合粉；
S3：将混合粉与甘氨酸、月桂醇硫酸酯钠和微晶纤维素、普鲁兰、萜烯树脂和泊洛沙姆，混合均匀，过20目筛，制粒；
S4：将步骤S3制得的片剂与双磷脂酰甘油和磷酸钙混合均匀，整粒，压片。
实施例11
制备方法：按照实施例10的方法制备。
实施例12
制备方法：
S11：按照实施例2的方法制备胶囊剂；
S12：将聚乙烯缩乙醛二乙胺醋酸酯、季戊四醇邻苯二甲酸酯和甘油三醋酸酯和聚乙二醇400溶于浓度为80％乙醇水溶液中，搅拌均匀，滤过，制得薄膜包衣液；
S13：将胶囊剂放入包衣锅内，喷入一定量的薄膜包衣液，使胶囊剂表面均匀湿润，冷冻干燥，蒸发溶剂；
S14：反复步骤S13的操作，使薄膜包衣增重1％，冷冻干燥，除尽残余溶剂，制得薄膜包衣胶囊剂。
实施例13
制备方法：
S11：按照实施例4的方法制备片剂；
S12：将聚乙烯缩乙醛二乙胺醋酸酯、季戊四醇邻苯二甲酸酯和甘油三醋酸酯和聚乙二醇400溶于浓度为80％乙醇水溶液中，搅拌均匀，滤过，制得薄膜包衣液；
S13：将片剂放入包衣锅内，喷入一定量的薄膜包衣液，使片剂表面均匀湿润，冷冻干燥，蒸发溶剂；
S14：反复步骤S13的操作，使薄膜包衣增重1％，冷冻干燥，除尽残余溶剂，制得薄膜包衣片剂。
实施例14
制备方法：
S11：按照实施例7的方法制备片剂；
S12：将聚乙烯缩乙醛二乙胺醋酸酯、季戊四醇邻苯二甲酸酯和甘油三醋酸酯和聚乙二醇400溶于浓度为80％乙醇水溶液中，搅拌均匀，滤过，制得薄膜包衣液；
S13：将片剂放入包衣锅内，喷入一定量的薄膜包衣液，使片剂表面均匀湿润，冷冻干燥，蒸发溶剂；
S14：反复步骤S13的操作，使薄膜包衣增重4％，冷冻干燥，除尽残余溶剂，制得薄膜包衣片剂。
实施例15
制备方法：按照实施例14的方法制备。
对照例1
对照例2
实施例3
对照例4
试验例1稳定性试验
1.1加速试验
取本发明实施例1、实施例3、实施例12和实施例15及对照例1和对照例2的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂，均在40℃±2℃下，相对湿度为75％±5％的条件下放置6个月，在试验期间1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，按中国药典中的规定，检测单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的性状、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的含量(标示量％)、有关物质(％)及崩解时限，结果见表1。
表1单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的加速试验结果
从表中可看出本发明实施例1、实施例3、实施例12和实施例15所提供的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂剂，经加速试验结果可知，放置6个月后，所述片剂的性状、含单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的量、有关物质及崩解时限均未发生明显的变化；而对照例1、对照例2和CN104490837中公开的口服制剂放置6个月后，片剂发黄，并且单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的含量显著下降，有关物质的量显著增加，崩解时限显著延长；表明本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂与对照例1和对照例2及CN104490837中公开的口服制剂相比，稳定性显著提高，并且与实施例1相比，实施例3、实施例12和实施例15中有关物质、崩解时限和含量变化值均比实施例1的低，由此得出加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠的混合物及薄膜包衣可以进一步提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的稳定性。
1.2长期试验
取本发明实施例1、实施例3、实施例12和实施例15及对照例1-4的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂，均于温度25℃±2℃下，相对湿度为60％±10％的条件下放置12个月，每3个月取样一次，分别于0个月、3个月、6个月、9个月、12个月、24个月取样，检测单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的性状、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的含量(标示量％)、有关物质(％)及崩解时限，结果见表2。
表2单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的长期试验
从表中可看出本发明实施例1、实施例3、实施例12和实施例15所提供的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂剂，经长期试验结果可知，放置24个月后，所述片剂的性状、含单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的量、有关物质及崩解时限均未发生明显的变化；而对照例1、对照例2和CN104490837中公开的口服制剂放置24个月后，片剂发黄，并且单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的含量显著下降，有关物质的量显著增加，崩解时限显著延长；表明本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂与对照例1和对照例2及CN104490837中公开的口服制剂相比，稳定性显著提高，并且与实施例1相比，实施例3、实施例12和实施例15中有关物质、崩解时限和含量变化值均比实施例1的低，由此得出加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠的混合物及薄膜包衣可以进一步提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的稳定性。
试验例2崩解时限检测
选择不同的崩解剂或不同的润滑剂，其余的组分与实施例8中的成分相同；根据中国药典中的规定，测片剂的崩解时限，结果见表3和表4。
表3不同崩解剂对片剂崩解时限的影响
从表中可看出，采用本发明特殊重量份数的甘氨酸、月桂醇硫酸酯钠和微晶纤维素的混合物才可显著提高口服制剂的崩解时限。
表4不同润滑剂对片剂崩解时限的影响
从表中可看出，采用本发明特殊重量份数的双磷脂酰甘油和磷酸钙的混合物作为润滑剂不会对片剂的崩解时限产生影响，而采用其余的润滑剂会延长片剂的崩解时限，并且片剂表面粗糙。
试验例3
选择不同的粘合剂，其余的组分与实施例8中的成分相同；根据中国药典中的规定，测片剂的脆碎度，结果见表5。
表5不同粘合剂对片剂脆碎度的影响
从表中可以看出，由普鲁兰、萜烯树脂和泊洛沙姆的混合物作为粘合剂不但使片剂具有很好的粘性，并且使片剂具有很好的硬度和脆碎度。
试验例4单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的溶出度试验
参照中国药典2010年版二部中收载的标准，对其单唾液酸四己糖神经节苷脂钠片剂的溶出度进行检查，方法如下：
分别取实施例1、实施例3和对照例3的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录XC第一法)进行测定；分别于5、15、30、45、60和120min取样10ml(立即补加同体积同温度的溶出介质)，过滤，精密吸取滤液4.5ml，置于5ml具塞试管中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液于263nm处测定其峰面积，计算各时间点的累积溶出量，结果见表6。
表6单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的累积溶出量
从表6可以看出，实施例1、实施例3的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂与对照例3的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂相比，其溶出度显著提高，120min内，本发明提供的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂几乎全部溶出；并且本发明实施例3提供的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的溶出度显著高于实施例1的口服制剂；由此得出加入十二烷基酰胺甜菜碱、木质素和三聚磷酸钠可提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的溶出度。
试验例5单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂的释放度试验
分别取实施例1、实施例12和对照例4的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠口服制剂，照释放度测定法(中国药典2010年版二部附录XD)测定进行测定；照溶出度测定法项下进行，在15min、30min、45min、60min和120min五个时间点取样，吸取溶液适量，及时补充相同体积的温度为37℃±5℃的溶出介质(溶出介质分别为0.1mol/L HCL溶液和0.2mol/L磷酸钠溶液(pH＝6.8))，滤过，照各品种向下规定的方法测定，计算每片的相对溶出百分率，检测结果分别见表7和表8。
表7在0.1mol/L HCL溶液中的相对溶出百分率
表8在0.2mol/L磷酸钠溶液中的相对溶出百分率
从上表中可以看出，本发明提供的薄膜包衣可以提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠在胃内的稳定性，使得制备的片剂在肠道内定向释放，进而降低胃酸对单唾液酸四己糖神经节苷脂钠片剂稳定性的影响。