本发明涉及皮炎湿疹治疗领域，特别地涉及一种多肽在制备用于治疗皮炎湿疹的药物中的用途。
背景技术：
：皮炎湿疹类疾患是皮肤科的常见病，其临床表现以皮疹对称分布、多样性、剧烈瘙痒且反复发作、易演变成慢性疾病为特征，该病可发生于任何年龄、任何部位、任何季节，占皮肤继发感染的30％左右，皮炎湿疹好发于婴幼儿，在婴幼儿中的发病率约为35.28％(刘捷等人.婴儿湿疹发病因素流行病学调查[J].中国妇幼保健,2008,23(21):3025-3026.)。皮炎湿疹病因复杂，包括内在与外在多方面因素，二者相互联系，协同作用。内因主要是患者的过敏体质、家族遗传、精神压力、内分泌、代谢、胃肠功能障碍、感染病灶等。在体内发病机制方面，学界认为皮炎湿疹主要是由于T细胞介导的细胞免疫紊乱所致。有研究结果显示皮炎湿疹患者外周血和皮损中Th1/Th2细胞失平衡，偏向于Th2方向，如皮损和外周血Th2细胞表达或分泌的白介素4和IL-5水平升高，而Th1细胞表达或分泌的γ干扰素和IL-2降低(YamanakaK,MizutaniH.Theroleofcytokines/chemokinesinthepathogenesisofatopicdermatitis.CurrProblDermatol2011,41:80-92.XuXGetal.XiaoyinRecipeforpsoriasisinducesaTh1/Th2balancedrifttowardTh2inperipheralbloodmononuclearcellsofexperimentalautoimmunethyroiditisrats.ChinJIntegrMed2012,18(2):137-145.)。皮炎湿疹的外因包括环境污染、放射源、化学制剂、化妆品、动物毒素、鱼虾、尘埃、日晒、搔抓、微生物等单一或综合作用。如婴幼儿的尿布皮炎(俗称“尿布疹”)发生的主要原因是水/湿度、摩擦、尿液、粪便和微生物等的综合作用。水/湿度不仅使得皮肤脆性增加而容易摩擦损伤，而且使得皮肤屏障功能变弱而导致化学毒素渗透或病原微生物增殖。尿液和粪便中的尿激酶、蛋白酶和脂肪酶具有腐蚀作用，从而破坏皮肤的完整性(TüzünY,WolfR,EnginB.Diaper(napkin)dermatitis:Afold(intertriginous)dermatosis.ClinDermatol.,2015,33(4):477-82.KlunkC,DominguesE,WissK.Anupdateondiaperdermatitis.ClinDermatol.,2014,32(4):477-87.)。湿疹患者与健康人相比，其皮肤微生物组成有着根本不同，前者皮肤中含有更多的金黄色葡萄球菌(IanD.Odell,etal.,Microbiome:Ecologyofeczema,NatureMicrobiology2016,16135)。接触性湿疹(即接触性皮炎)的患者与过敏源接触或与一般刺激性比如酸、清洁剂或其它化学品接触的区域会发红、瘙痒和灼热。接触性湿疹的其它实例包括对食物、清洁剂、皂、镍(珠宝中存在)、化妆品、织物、衣服和香料的反应(SultanT.Al-Otaibietal.,Managementofcontactdermatitis,JournalofDermatology&DermatologicSurgery19(2015)86–91)。目前，治疗皮炎湿疹的药物有如下几类：1.糖皮质激素，其为治疗皮炎湿疹的主要药物，有抗炎、抗过敏作用，见效快，常见的如氢化可的松、丁酸氢化可的松、曲安奈德，长期使用这类药物会引起较多不良反应，如皮肤潮红干燥、色素沉着、毛细血管扩张、并易形成药物依赖性皮炎和反跳性皮炎，应慎用(张堂德等人，外用糖皮质激素的副作用及防治[J].皮肤性病诊疗学杂志.2012(4)：263-266)；2.免疫调节剂，具体药物如他克莫司(Protopic)和吡美莫司(Elidel)，这些药物被称为神经钙蛋白抑制剂，在2005年，FDA发出关于使用这些药物的警告，引用了动物研究，其显示在使用这些药物与发展某些类型的癌症之间的可能关联。因此，从致癌和其它角度来看，使用神经钙蛋白抑制剂显得是有问题的；3.抗组胺药，抗组胺药可以拮抗组胺，能起到止痒和抗过敏的作用，苯海拉明、扑尔敏和异丙嗪等第一代抗组胺药物具有较强的中枢神经抑制作用，第二代抗组胺药物由于发现有较明显的心脏毒性而逐渐减少使用(如特非那丁、阿司米唑等)(沈丽芳等人，几种抗组胺药物的作用特点及应用，中外医疗，2009(7)：176.)4.外用抗生素，皮炎湿疹发生时，皮肤破损容易导致感染，而且患儿因瘙痒感容易搔抓破损处，更易导致细菌侵入。局部外用抗生素可以控制感染，防止细菌侵入，但抗生素容易产生耐药性。5.其他，如氧化锌、中医药等，外用氧化锌软膏安全有效，应用较广，但其对愈合及创面恢复较慢，且易引起感染；中医药的内治法、外治法及母子同治等中医特色疗法对皮炎湿疹具有较好疗效，但其煎熬费时，见效慢。抗菌肽是一类碱性多肽，一般由12～50个左右氨基酸组成，具有广谱抗菌性。目前，抗菌肽数据库(APD,http://aps.unmc.edu/AP/)收录了来自6类生物共2798种抗菌肽，其中，282种来自细菌，4种来自古生菌，8种来自原生生物，13种来自真菌，341种来自植物，2096种来自动物。除抗菌作用外，不同的抗菌肽还具有不同的作用，如Melittin对U937人单核白细胞病细胞、Du145前列腺癌细胞、SKOV3卵巢癌细胞、B16小鼠黑色素瘤细胞、BEL-7402人肝癌细胞有抑制或杀灭作用(S.Saini,etal.,MelittinactivatesendogenousphospholipaseDduringcytolysisofhumanmonocyticleukemiacells,Toxicon,vol.37,no.11,pp.1605–1619,1999.P.J.Russell,etal.,Cytotoxicpropertiesofimmunoconjugatescontainingmelittin-likepeptide101againstprostatecancer:invitroandinvivostudies,CancerImmunology,Immunotherapy,vol.53,no.5,pp.411–421,2004.)；LL-37被用于促进静脉性腿部溃疡愈合的局部治疗(A.etal.,(2014).TreatmentwithLL-37issafeandeffectiveinenhancinghealingofhard-to-healvenouslegulcers:arandomized,placebo-controlledclinicaltrial.WoundRepairRegen.22,613–621.doi:10.1111/wrr.12211)，LL-37促进伤口愈合的机理还不清楚，但可能涉及到表皮再生、血管生成及炎症的伤口修复组分；牛乳铁蛋白在THP-1细胞中可通过抑制LPS(TLR4)对TNF-α和IL-6的诱导来调节免疫系统(Mattsby-Baltzer,etal.L.A.(1996).Lactoferrinorafragmentthereofinhibitstheendotoxin-inducedinterleukin-6responseinhumanmonocyticcells.Pediatr.Res.40,257–262.)；人乳铁蛋白衍生物PXL01的透明质酸凝胶制剂用于预防术后黏连(Wiig,etal.(2014).PXL01insodiumhyaluronateforimprovementofhandrecoveryafterflexortendonrepairsurgery:randomizedcontrolledtrial.PLoSONE9:e110735.)。申请人在研究中发现了本发明所述多肽，该多肽为一种抗菌肽，并在此前就其抗微生物等特性申请了多项专利，现有技术只报道了所述多肽的抗菌性能，未见其具有治疗皮炎湿疹的报道。技术实现要素：针对现有技术的缺陷，申请人惊讶的发现本发明所述多肽对皮炎湿疹有较好效果，针对现有技术的缺陷，本发明的首要目的是提供一种多肽在制备用于治疗皮炎湿疹的药物中的用途，本发明的第二个目的是提供一种治疗皮炎湿疹的药物组合物，其特征在于：该组合物是以有效剂量的所述多肽为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的制剂。本发明的第三个目的是提供一种治疗皮炎湿疹的方法。本发明所述多肽的氨基酸序列为SEQID:NO.1。本发明中的含量，无特殊说明下均为质量百分数。本发明所述的治疗皮炎湿疹的含义包括但不限于：改善或减轻了湿疹相关的症状、缩短症状持续的时间、不恶化疾病状态、延迟或减慢疾病的进展。在一个实施方式中，本发明提供一种多肽在制备用于治疗皮炎湿疹的药物中的用途，所述多肽浓度为0.01％-1％。在一个实施方式中，本发明提供一种多肽在制备用于治疗皮炎湿疹的药物中的用途，所述多肽浓度为0.02％-0.2％。所述药物为外用固体制剂、半固体制剂或液体制剂。优选的固体制剂是冻干粉剂。优选的半固体制剂是膏剂或凝胶制剂，优选的液体制剂为喷雾剂。在一个实施方式中，本发明提供一种治疗皮炎湿疹的药物组合物，其特征在于：该组合物是以有效剂量的所述多肽为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的制剂。在一个实施方式中，本发明提供一种治疗皮炎湿疹的药物组合物，所述多肽浓度为0.01％-1％。在一个实施方式中，本发明提供一种治疗皮炎湿疹的药物组合物，所述多肽浓度为0.02％-0.2％。所述药物为外用固体制剂、半固体制剂或液体制剂。优选的固体制剂是冻干粉剂。优选的半固体制剂是膏剂或凝胶制剂，优选的液体制剂为喷雾剂。在一个实施方式中，本发明涉及一种用于治疗皮炎湿疹的方法，其包括下述步骤：向受皮炎湿疹影响的部位施用本发明所述多肽制剂，所述多肽的氨基酸序列为SEQID:NO.1。所述受皮炎湿疹影响的部位可以包含与表现皮炎湿疹症状的部位毗邻的部位。皮炎湿疹症状包括但不限于：不适，瘙痒，灼热，皮疹，发疱，表皮坏死，脱屑，变色，和/或色素沉着过度。本发明提供了一种已知多肽治疗皮炎湿疹的新用途，除具有抗微生物作用外，可能还具有调节免疫系统、促进伤口愈合的作用，与现有技术相比，该多肽制剂治疗皮炎湿疹效果较好；本发明所述多肽保水性好，可防止皮损部位干燥引起的症状加剧；本发明所述多肽安全性高，最终降解产物为氨基酸，无不良反应；由于所述多肽是通过与微生物细胞膜作用而抗菌，不易使细菌产生耐药性。具体实施方式本发明提供了一种多肽用于治疗皮炎湿疹的用途，所述多肽无特殊说明均为氨基酸序列为SEQID:NO.1。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，实施例中，加入的各原料除特别说明外，均为市售。本发明所述多肽为一种抗菌肽，已有数据只披露了所述多肽具抗菌功效。申请人在研究过程中，意外的发现本发明所述多肽具有治疗湿疹的作用，具体治疗机理还不明确，但基于其他抗菌肽的现有文献，申请人大胆推测，本发明公开的所述多肽可能具有多种未知功能，其在调节身体免疫系统的基础上，消除皮炎湿疹区域的微生物、保持皮肤水分、促进血液循环和皮损的愈合，最终达到治疗皮炎湿疹的作用。本发明提供一种治疗皮炎湿疹的药物组合物，其特征在于：该组合物是以有效剂量的所述多肽为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的制剂。所述辅料可以是蔗糖、淀粉、糊精、硬脂酸镁、山梨醇、甘露醇、乳糖、微晶纤维素、微粉硅胶、羧甲基纤维素、水等药物制剂中常规辅料的一种或多种的组合，具体选择哪一种或哪几种辅料应根据所需要制成的剂型来确定。所述的辅助性成分指的是能提高所述多肽疗效或者是也能治疗湿疹的药物如糖皮质激素、抗生素或其它中药。本发明所述多肽在制备用于治疗皮炎湿疹的药物时，可以制成多种剂型，所述剂型应是药学上可接受的剂型，总体上是指所述多肽与包括在所述剂型、和/或以此被治疗的患者中的其他组分在化学上和/或毒理学上相兼容的一种物质或组合物。所述剂型可以包括喷剂、乳剂、悬浊液、膏剂、敷料、洗液、凝胶剂、粉剂、或其他固体、半固体或液体组合物。此类组合物可以包含：保湿剂、水合剂、渗透剂、防腐剂、乳化剂、天然或合成油、表面活性剂、凝胶剂、增稠剂、蜡、气味吸收剂、着色剂、染色剂、粉剂、粘度调节剂和水，以及矿物质、多酚、有机硅、维生素等。优选的，所述药物为外用固体制剂、半固体制剂或液体制剂。优选的固体制剂是冻干粉剂。优选的的半固体制剂是膏剂或凝胶制剂，优选的液体制剂为喷雾剂。本发明所述多肽可通过化学合成获得，也可通过基因工程技术表达、分离纯化得到(具体方法可参见Sambrooketal.，MolecularCloning：ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，1989)，也就是参考申请人在先申请专利(申请号：201310245373.0，发明名称：一种抗菌肽的制备方法和应用)中所述多肽的制备方法。本部分实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。实施例1本发明所述冻干制剂的的制备将辅料甘露醇、精氨酸溶解，与本发明所述多肽混合，调整pH值到7.2，组成每毫升液体含1mg所述多肽、32mg甘露醇、15mg精氨酸，经过滤除菌后，冷冻干燥，即为冻干制剂。实施例2本发明所述喷雾制剂的制备为便于运输和保存，将本发明所述多肽制备成冻干制剂，使用时可根据需要配制为喷雾制剂：将冻干制剂用生理盐水或医学常用溶媒溶解，溶解后的所述多肽浓度范围为0.01％-1％，装入符合要求的喷雾器中，即可喷雾使用。实施例3本发明所述膏剂的制备将54％-54.9％的医用凡士林、45％的液状石蜡在搅拌下加热至65℃，得到熔融物。于该温度将0.01％-1％本发明所述多肽加入，并搅拌所得的混合物直到得到完全湿润的化合物。然后将混悬物于65℃用UltraTurrax仪器于24000rpm处理5min，使之匀化。将得到的组合物缓慢冷却至25℃，得到本发明所述膏剂。实施例4本发明所述凝胶剂的制备将0.5％-2％的卡波姆充分搅拌均匀后，加入1％-3.5％的透明质酸、0.06％-0.1％的甘油以及0.01％-1％的本发明所述多肽，继续搅拌均匀后，即得到本发明所述的凝胶剂。实施例5本发明所述多肽的保水性配制4％的海藻糖、0.5g/ml所述多肽溶液，甘油中加入10％质量比的水，将其涂布在贴有3M胶布的培养皿上，称取样品质量计作m1。将称取好的样品放置在保干器中，并放置20ml饱和硫酸铵溶液于保干器中，维持一定湿度，分别于4h，8h称取样品的质量计作m2。保湿率＝m2/m1×100％。试验结果见表1表1保水率情况比较时间10％甘油海藻糖所述多肽4h231％-182％59.4％8h294％-327％51.1％如表1所示，本发明所述多肽的保水率虽不如甘油，但比一般保湿化妆品中使用的海藻糖的保水率要高的多。实施例61.对象选择中国医学科学院皮肤病研究所2015年5月至2016年5月收治的皮炎湿疹患者72例，患者均有不同程度的皮疹、瘙痒、丘疱疹、渗出皮损等，症状主要分布在面部、阴部、耳后、四肢屈侧、乳房、手部等位置。将患者随机分成四组，1组对照组和3组治疗组，治疗组按所述多肽含量分为：低剂量组(0.02％)、中剂量组(0.1％)、高剂量组(0.2％)，每组18例。四组患者性别、年龄、病程、病种等一般资料差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。2.方法对照组使用丁酸氢化可的松软膏(商品名：尤卓尔，天津药业集团有限公司生产，国药准字H10940095)涂于患处，治疗组分别使用本发明实施例中所述的3种不同浓度的多肽制剂喷涂或涂抹于患处，低剂量组为来自实施例2所述的多肽喷雾剂，中剂量组为来自实施例3所述的多肽膏剂，高剂量组为来自实施例4所述的多肽凝胶剂，采用每天2次；喷涂或涂抹时间为3天至2周，根据皮肤的康复情况，皮疹消失、瘙痒症状消失了，就停止用药。用药后的1个月，随机访问被调查对象，观察是否复发。3.评价标准用药后，治愈：皮疹全部消退，瘙痒症状消失；显效：症状减轻；无效：皮疹消退＜30％，瘙痒症状减轻不明显。有效率＝治愈率+显效率4.结果试验组在用药过程中未发生明显不良反应，对照组出现1例灼热干燥脱屑，自行消失而不影响治疗，结果见表2。表2四组治疗效果比较(％，n)实施例7本发明所述多肽对尿布疹的作用自2015年1月份在浙江中医药大学附属第二医院儿科和杭州师范大学附属医院儿科开始使用实施例2所述0.01％多肽喷雾制剂对婴儿尿布疹进行局部治疗，通过与氧化锌制剂对比观察疗效。1.对象与方法1.1分组2015年1月-2016年10月两院就诊的年龄≤90d的尿布疹患儿129例，男性46例、女性83例。根据皮损程度再分3度。I度：局部潮红；Ⅱ度：伴有隆起皮疹；Ⅲ度：皮疹有渗出液或糜烂。其中I度57例、Ⅱ度47例、Ⅲ度25例。按就诊日期，将其分为对照组和治疗组，对照组41例、治疗组88例，两组患儿性别、年龄、病程、皮损程度比较差异无统计学意义(P均>0.05)，具有可比性，情况比较见表3。表3两组一般情况比较1.2方法：两组病例均于每次大小便后温水洗净臀部及会阴部，用软毛巾揩干水份并更换尿布。治疗组每次换尿布时在皮损处喷洒实施例2所述多肽喷雾制剂3-5喷；对照组每次换尿布时在皮损处涂抹氧化锌制剂(强生护臀霜)。1.3.疗效判断标准：观察疗效期限为治疗后7天，痊愈：皮损病变在7天内消失；好转：皮损病变减轻但在治疗第7天未消退；无效：治疗7天皮损无变化或加重。有效病例是指痊愈病例和好转病例的总和。1.4.统计学方法：采用SPSS11.5软件进行统计学处理，计数资料采用x2检验，计量资料采用t检验或F检验。2结果2.1两组疗效比较治疗7天后，两组疗效见表4，经列联表卡方检验，差异有非常显著意义(x2＝15.006，P＝0.001)，经合并，对照组有效率为85.4％(35/41)，治疗组有效率为96.6％(85/88)，差异有显著意义(x2＝5.430，P＝0.020)。9例无效患者均为Ⅲ度，对治疗无效的患者创面分泌物进行细菌培养，结果对照组病例有2例可见白色念珠菌生长，对照组和治疗组病例各有1例表皮葡萄球菌生长。有白色念珠菌生长的2例改用喷洒实施例2所述多肽制剂3天后创面明显好转。表4两组疗效比较(％,n)2.2两组尿布疹消退时间比较剔除9例无效和4例观察期内好转而未痊愈患者后，在120例痊愈患者中，对照组尿布疹消退时间为4.42±1.46天，治疗组尿布疹消退时间为3.64±1.03天，差异有显著意义(t＝3.223，P＝0.002)。2.3不同皮损程度治愈时间比较两组120例痊愈患者中，不同皮损程度的治愈时间比较见表2，可见在I度患者中，两组治愈时间差异无显著意义(P＞0.05)，但在Ⅱ度和Ⅲ度的表5两组不同皮损程度治愈时间比较患者中，治疗组治愈时间比对照组短，差异有显著意义(P＜0.05)。在治疗组中，通过F检验表明，实施例2所述多肽制剂对不同皮损愈合时间不同，皮损越轻愈合越快(F＝5.694，P＝0.005)，两两比较显示，I度治愈时间比Ⅲ度短，差异有非常显著意义(P＝0.004)，但I度和Ⅱ度、Ⅱ度和Ⅲ度治愈时间差异无显著意义(P＝0.401、P＝0.108)。2.4两组不良反应发生情况比较两组新生儿治疗期间均未发现明显不良反应。结果显示，实施例2所述多肽制剂治疗组有效率高于对照组，差异有显著意义，且7天治疗观察期，治疗组大部分为治愈病例，对照组未愈的有白色念珠菌感染的2例经实施例2所述多肽制剂治疗后明显起效，在两组痊愈病例的皮疹消退时间比较中，实施例2所述多肽制剂治疗组皮疹消退时间为4.42±1.46天，明显短于对照组的3.64±1.03天，差异有显著意义。在不同皮损程度的治愈时间比较表明，I度尿布疹治疗组与对照组治愈时间无显著差异，而Ⅱ度和Ⅲ度尿布疹实施例2所述多肽制剂治疗组治愈时间比对照组短，差异有显著意义。在实施例2所述多肽制剂治疗组中，不同皮损治愈时间不同，皮损越重治愈时间越长，符合转归规律。以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的
技术领域：
，均同理包括在本发明的专利保护范围内。SEQUENCELISTING<110>江苏吉锐生物技术有限公司<120>一种多肽在制备用于治疗皮炎湿疹的药物中的用途<160>1<170>PatentInversion3.3<210>1<211>18<212>PRT<213>人工序列<400>1GlyArgPheLysArgPheArgLysLysPheLysLysLeuPheLysLys151015LeuSer当前第1页1 2 3