取代的间二氮杂萘衍生物的制作方法

专利名称：取代的间二氮杂萘衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及某些间二氮杂萘化合物，也涉及其药学上可接受的盐。本发明的化合物抑制某些生长因子受体蛋白酪氨酸激酶(PTK)地作用，由此抑制某些细胞型的异常生长。因此本发明的化合物是抗癌药物并可用于哺乳类动物癌的治疗。另外，本发明涉及所述的间二氮杂萘的生产、在癌治疗方面的应用以及含有间二氮杂萘的药物制剂。
蛋白酪氨酸激酶是一类将磷酸基团从ATP催化转移到位于蛋白质底物的酪氨酸残基的酶。很明显，蛋白酪氨酸激酶在正常细胞生长中起作用。许多生长因子受体蛋白以酪氨酸激酶起作用，并且通过该过程影响信号。生长因子与这些受体的相互作用是细胞生长正常调节的必需事件。然而，在某些条件下，由于这些受体或者突变或者过量表达，这些受体可变为异常，其结果是细胞繁殖不受控制，这导致肿瘤生长，最终导致我们所知的疾病-癌[Wilks A.F.，Adv.Cancer Res.，60，43(1993)和Parsons，J.T.；Parsons，S.J.，Important Advance inOncology，De Vita V.T.Ed.，J.B.Lippincott Co.，Phila.，3(1993)]。生长因子受体激酶和其已鉴定的原癌基因以及本发明化合物的靶中有表皮生长因子受体激酶(EGF-R激酶，erbB原癌基因的蛋白产物)和由erbB-2(也称为neu或HER2)癌基因产生的产物。由于磷酸化事件是发生细胞分裂所必需的信号，以及由于过量表达或突变的激酶与癌有关，因此该事件的抑制剂-蛋白酪氨酸激酶抑制剂将有治疗价值，用来治疗癌和其它特征为非控制的或异常细胞生长的疾病。例如，erbB-2癌基因受体激酶产物的过量表达与人类乳腺癌和卵巢癌有关[Slamon，D.J.，et al.，Science，244，707(1989)和Science，235，1146(1987)]。EGF-R激酶的异常与表皮肿瘤[Resis，M.，et al.，Cancer Res.，51，6254(1991)]、乳腺癌[Macias，A.，et al.，Anticancer Res.，7，459(1987)]和涉及其它主要器官的肿瘤[Gullick，W.J.，Brit.Med. Bull.，47，87(1991)]有关。由于异常的受体激酶在癌发病机理中所起作用的重要性，因此最近的许多研究都涉及作为潜在抗癌治疗药物的特异的PTK抑制剂的研制[一些最近的综述Burke.T.R.，Drugs Future，17，119(1992)和Chang，C.J.；Geahlen，R.L.，J. Nat.Prod.，55，1529(1992)]。
本发明的化合物是某些4-苯胺基间二氮杂萘。在本专利申请中，间二氮杂萘环系统将按下式所示进行标号
我们注意到与本发明化合物相比在位置5-8的取代基性质和的位置都不同的其它4-苯胺基间二氮杂萘有PTK抑制活性。从欧洲专利申请520,722A1得知，某些4-苯胺基间二氮杂萘含有在位置5-8的氢、氯、三氟甲基或氮取代基。上述申请中的化合物中的任何一个都没有本发明化合物含有的取代基的独特化合作用。另外，值得注意的是，尽管上述欧洲专利申请的化合物在抗癌实用性方面作了权利要求，但没有提供体内抗癌效果的证明。从欧洲专利申请566,226A1得知，某些4-苯胺基间二氮杂萘在位置5-8可选的含有许多取代基。上述申请中的化合物中的任何一个都没有本发明化合物含有的取代基的独特化合作用。另外，值得注意的是，尽管上述欧洲专利申请的化合物在抗癌实用性方面作了权利要求，但没有提供体内抗癌效果的证明。在上述欧洲专利申请中描述的唯一的体内活性是抑制由TGF-α刺激的大鼠肝细胞的生长。从欧洲专利申请635,498A1得知，某些4-苯胺基间二氮杂萘在位置6可选的含有许多取代基，而在位置7必须有一个卤素。上述申请中的化合物中的任何一个都没有本发明化合物含有的取代基的独特化合作用。另外，值得注意的是，尽管上述欧洲专利申请的化合物在抗癌实用性方面作了权利要求，但没有提供体内抗癌效果的证明。在上述欧洲专利申请中描述的唯一的体内活性是抑制由TGF-α刺激的大鼠肝细胞的生长。另外，我们知道某些间二氮杂萘抑制剂不含有4-苯胺基基团。从欧洲专利申请602,851A1得知，某些间二氮杂萘在4位置不含有4-苯胺基基团并且位置在5-8含有许多取代基。上述申请中的化合物中的任何一个都没有本发明化合物含有的取代基的独特化合作用。另外，值得注意的是，尽管上述欧洲专利申请的化合物在抗癌实用性方面作了权利要求，但没有提供体内抗癌效果的证明。在上述欧洲专利申请中描述的唯一的体内活性是抑制由TGF-α刺激的大鼠肝细胞的生长。从专利申请WO95/19774得知，某些PTKs抑制剂杂环含有与本发明4-苯胺基间二氮杂萘相似的嘧啶环。该申请没有提及4-苯胺基间二氮杂萘，也没有提及本发明化合物含有的取代基的独特化合作用。另外，值得注意的是，尽管上述欧洲专利申请的化合物在抗癌实用性方面作了权利要求，但没有提供体内抗癌效果的证明。从专利申请WO95/157581得知，某些间二氮杂萘在位置5-7可选的含有许多取代基。上述申请中的化合物中的任何一个都没有本发明化合物含有的取代基的独特化合作用。另外，值得注意的是，尽管上述欧洲专利申请的化合物在抗癌实用性方面作了权利要求，但没有提供体内抗癌效果的证明。
除上述专利申请外，大量刊物描述了4-苯胺基间二氮杂萘Fry，D.W.，et a1.，Science，265，1093(1994)、Rewcastle G.W.，et al.，J.Med.Chem.，38，3482(1995)和Bridges，A.J.，et al.，J. Med. Chem.，39，267，(1996)。这些刊物中描述的化合物中的任何一个都没有本发明化合物含有的取代基的独特化合作用。另外，值得注意的是，在这些论文中没有描述体内抗癌效果的证明。
PTK将磷酸基团从ATP分子催化转移到位于蛋白质底物的酪氨酸残基上。迄今在工艺上知道的抑制剂通常不是与ATP竞争就是与激酶的蛋白质底物竞争。其中的一些抑制剂、即所谓的混合竞争抑制剂可以既与ATP竞争，同时又与底物竞争；所有这类竞争抑制剂作为可逆型抑制剂起作用。工艺上知道的4-苯胺基间二氮杂萘是与ATP竞争的可逆型抑制剂[Fry，D.W.，et al.，Science，265，1093(1994)]。由于细胞中ATP的正常浓度很高(毫摩尔)，既然与ATP竞争的化合物在细胞中的浓度不可能达到将ATP从其结合位点取代所必需的浓度，因此，该化合物可能在体内缺乏活性。正如所证明的，本发明的间二氮杂萘抑制剂有以不可逆方式抑制这些PTKs的独特能力，因而不与ATP或蛋白质底物竞争。由于本发明的化合物可与位于酶活性位点的氨基酸残基形成共价键，因此可以作为不可逆型抑制剂。如下所示，与可逆型抑制剂相比，这可增强本发明化合物在治疗方面的有用性。特别是表明本发明化合物中含有的取代基的独特性质和独特的化合作用导致抑制剂与酶的共价结合。本发明化合物的这些独特的性质使其在以癌的体内模式抑制人类肿瘤生长方面作出贡献。
本发明提供式1的化合物或其药学上可接受的盐
其中X是苯基，它可选地被一个或多个选自卤素、1-6个碳原子的烷基、
1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、氮、羧基、2-7
个碳原子的烷酯基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳
原子的烷醇氨基的取代基取代；R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子
的烷氧基、羟基或三氟甲基；R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟
甲基；Y是选自下列的原子团
R3是独立的氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷酯
基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基；n＝2-4；但须Y的每个R3可以相同或不同。
药学上可接受的盐是那些由下列有机酸或无机酸衍生的盐乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、葡萄糖酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸和所知的可接受的相似的酸。
烷基、烷氧基、烷酯基、烷基羰基和烷醇氨基取代基的烷基部分包括直链碳链也包括支链碳链。羧基定义为-CO2H基。2-7个碳原子的烷酯基定义为-CO2R”基，其中R”是1-6个碳原子的烷基。烷基羰基定义为-COR”，其中R”是1-6个碳原子的烷基。当X被取代时，推荐单-取代、双-取代或三-取代，最好是单取代。本发明的化合物含有不对称中心时，本发明包括单个的R和S对映体，也包括与此化合物有关的消旋体。
本发明的化合物中推荐的成员包括那些其中R、R1和R2是氢的化合物；那些其中R、R1和R2是氢而X不是未取代的就是用卤素或1-6个碳原子的烷基取代的化合物。
下面流程A描述了由通式9包括的本发明化合物的制备，其中R、R1、R2、R3、X和n已定义，而R4是1-6个碳原子的烷基(最好是异丁基)。Y’是选自以下的原子团
其中，R’3各自独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷酯基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基。按照流程A中描述的反应顺序，通式2的5-硝基-氨基苯甲腈与或不与含有供给通式3脒的过量的二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛的溶液一起在大约100℃加热。将脒3和苯胺4的溶液在乙酸中加热1-5小时，产生通式5的6-硝基-4-苯胺基间二氮杂萘。5中的氮基团用诸如铁之类的还原剂在乙酸-乙醇混合物中、在较高温度下还原，产生通式6的6-氨基-4-苯胺基间二氮杂萘。用或者通式7的酰基氯或者通式8的混合酸酐(由相应的羧酸制备)在诸如四氢呋喃(THF)之类的惰性溶剂中、在诸如吡啶或三乙基胺之类的有机碱存在下将6进行酰化，产生由通式9代表的本发明的化合物。在7或8含有不对称碳原子的情况下，它们可以作为消旋体或作为单独的R或S对映体使用，在这种情况下，本发明化合物分别以消旋活性形式或R和S光学活性形式存在。制备本发明化合物需要的通式2的5-硝基-氨基苯甲腈或者是工艺上已知的，或者可以用下列参考文献中描述的工艺上已知的步骤制备Baudet，Recl.Trav.Chim.Pays-Bas，43，710(1924)；Hartmans，Recl.Trav.Chim.Pays-Bas，65，468，469(1946)；Taylor et al.，J.Amer.Chem.Soc.，82，6058，6063(1960)；Taylor et al.，J.Amer.Chem.Soc.，82，3152，3154(1960)；Deshpande；Seshadri，Indian J.Chem.，11，538(1973)；Katritzky，Alan R.；Laurenzo，Kathleen S.，J.Org.Chem.，51(1986)；Niclas，Hans-Joachim；Bohle，Matthias；Rick，Jens-Detlev；Zeuner，Frank；Zoelch，Lothar，Z.Chem.，25(4)，137-138(1985)。
流程A
下面流程B中描述了通式12所包括的本发明化合物的制备，其中R、R1、R2、R3、X和n已在上面进行了描述。每个R5独立地是氢、苯基或1-6个碳原子的烷基。按照流程B描述的反应，将通式10的6-氨基-4-苯胺基间二氮杂萘(按流程A制备)用通式11的环酸酐在诸如四氢呋喃的惰性溶剂中、在诸如吡啶或三乙基胺之类的碱性催化剂存在下酰化。
流程B
本发明典型的化合物在几个标准药理学实验步骤中进行评价，结果显示本发明化合物具有显著的蛋白酪氨酸激酶抑制剂活性，并且是抗增殖药物。因而，基于标准药理学实验步骤中所显示的活性，本发明化合物可用作抗肿瘤药物。所用的实验步骤和结果示于下面。
通式19所包括的本发明化合物的制备在下面流程C中进行了描述，其中Y’、R4和X上面已描述过。按照流程C描述的反应，4-氯-6-氮间二氮杂萘13(Morley，JS.和Simpson，J.Chem.Soc.，360(1948))用诸如亚硫酸氢钠之类的还原剂，在含有四氢呋喃和水的两相系统中，在少量相转移催化剂存在下，还原为6-氨基-4-氯间二氮杂萘14。用或者通式15的酰基氯或者通式16的混合酸酐(由相应的羧酸制备)在诸如四氢呋喃(THF)之类的惰性溶剂中、在诸如吡啶或N-甲基吗啉之类的有机碱存在下将14酰化，产生通式17的化合物。在15或16含有不对称碳原子的情况下，它们可以作为消旋体或作为单独的R或S对映体使用，在这种情况下，本发明化合物分别以消旋活性形式或R和S光学活性形式存在。将通式17的化合物与通式18的苯胺在诸如异丙醇之类的惰性溶剂中加热，产出用通式19表示的本发明化合物。
流程C
用通式26包括的本发明化合物的制备在下面流程D中进行了描述，其中Y’、R4和X上面已描述过。按照流程D描述的反应，20(按流程A制备)的氮基团用钯催化剂和本身可以是氢或环己烷的氢源还原为相应的氨基化合物21。用或者通式22的酰基氯或者通式23的混合酸酐(由相应的羧酸制备)在诸如四氢呋喃(TJF)之类的惰性溶剂中、在诸如吡啶或N-甲基吗啉之类的有机碱存在下将21酰化，产生通式24的化合物。在22或23含有不对称碳原子的情况下，它们可以作为消旋体或作为单独的R或S对映体使用，在这种情况下，本发明化合物分别以消旋活性形式或R和S光学活性形式存在。将通式24的化合物与通式25的苯胺在诸如乙酸之类的惰性溶剂中加热，产生用通式26表示的本发明化合物。
流程D
表皮生长因子受体激酶(EGF-R)的抑制
对这些试验化合物对抑制酶-表皮生长因子受体激酶催化的多肽底物酪氨酸残基的磷酸化的能力进行了评价。多肽底物(RR-SRC)的序列为arg-arg-1eu-ile-glu-asp-ala-glu-tyr-ala-ala-arg-gly。获得的酶为A431细胞(美国典型培养物保藏中心，Rockville，MD)的膜提取物。A431细胞在T175烧瓶中生长至80％Co。细胞用不含Ca2+的磷酸缓冲盐(PBS)洗涤两次。含1.0mM乙二胺四乙酸(EDTA)的20mlPBS的烧瓶，在室温下旋转1.5小时，然后600g离心10分钟。细胞在每5×106个细胞1ml的冷裂解缓冲液中{10mM4-(2-羟乙基)-1-磺酸哌嗪乙烷(HEPES)，pH7.6，10mM NaCl，2mM EDTA，1mM苯甲基磺酰基氟(PMSF)，10mg/ml抑肽酶，10mg/ml抗纤维蛋白溶酶制剂(Leupeptin)，0.1mM原钒酸钠}，在Dounce匀浆器中在冰上匀浆10个冲程进行增溶。将裂解物在600g离心10分钟，首先除去细胞碎片，上清液再在4℃、100,000g离心30分钟。将膜片悬浮于1.5ml HNG缓冲液中(50mM HEPES，pH7.6，125mM NaCl，10％甘油)。将膜提取物分成等分部分，立即在液氮中冷冻并贮藏于-70℃。
将试验化合物在100％二甲基亚砜(DMSO)中制成10mg/ml的储液。在试验之前，储液用缓冲液(30mM Hepes pH7.4)稀释为500mM，然后连续稀释至所需浓度。
将一等分A431膜提取物(10mg/ml)在30mM HEPES(pH7.4)中稀释，使蛋白浓度为50ug/ml。在4μl酶制剂中加入EGF(1μl，12μg/ml)，在冰上保温10分钟，再加入4μl试验化合物或缓冲液，该混合物在冰上保温30分钟。将在分析缓冲液中以1∶10稀释的33P-ATP(10mCi/ml)与浓度为0.5mM的底物多肽一起力入其中(对照反应不加试验化合物)，让反应在30℃进行30分。用10％TCA终止反应，在试管全速微离心15分钟后，在冰上放置10分钟。用一部分悬浮液在P81磷酸纤维素圆片上点样，先用1％乙酸洗涤两次，然后用水洗涤5分钟，每次洗涤后进行闪烁计数。本发明典型化合物的抑制数据示于表1中。IC50是还原所有磷酸化底物所需的试验化合物浓度的50％。至少测定三个不同浓度的试验化合物的抑制％，然后从剂量对应曲线评价IC50值。用下面的公式评价抑制％
抑制％＝100-[CPM(药物)/CPM(对照)]×100
其中CPM(药物)的单位为每分钟计数、表示30分钟后在试验化合物存在下、在30℃用液闪计数测定的、通过酶加到RR-SRC多肽底物的放射性标记的ATP(g-33P)量。CPM(对照)是以每分钟计数单位的、表示30分钟后在缺乏试验化合物的情况下、在30℃用液闪计数测定的、通过酶加到RR-SRC多肽底物的放射性标记的ATP(g-33P)量。CPM值用在缺乏酶的情况下、由ATP产生的背景计数以校正。表1中的IC50值是进行的试验的平均值。
表1
表皮生长因子受体激酶的抑制
化合物 IC50(μM)试验数
实施例40.012 5
实施例50.198 4
实施例60.51
实施例70.05 1
实施例80.04 2
实施例90.002 20
实施例10 0.11 2
实施例11 0.056 4
实施例13 10-7 1
实施例14 1.01
试验化合物与表皮生长因子受体激酶共价结合的确定
将一等分的A431酶提取物(按上述制备)用30mM Hepes缓冲液(pH7.4，含有12μg/mlEGF)稀释为50-100μg/ml，使得在标准试验条件下，发生大约2％的反应并且EGF的终浓度为2.4μg/ml(如上述标准分析)。使用前将该混合物在4℃至少保温10分钟。该酶制剂用于下面的透析步骤。
将溶于5％二甲基亚砜(DMSO)的48μl试验化合物(或仅为48μl5％二甲基亚砜的对照)加到60μl酶制剂中。试验化合物的浓度选为高于IC50值的20-100倍，以确保理想地达到80-90％的抑制。酶-抑制剂溶液在4℃保温45-60分钟。对于未透析的对照试验步骤，用9μl等分的酶-抑制剂溶液按上述标准方法进行评价。对于透析试验步骤，将60μl等分的酶-抑制剂溶液置于Pierce Microdialyzer Systen 100的微孔中，在4℃对30mM含有1.25μg/ml EGF的Hepes，缓冲液透析24小时，其间更换两次缓冲液(每次更换缓冲液前至少透析3小时)。使用分子量为8000的切下的膜。9μl(至少双份)等分的透析溶液用上述标准草案对其活性进行评价。未加试验化合物的酶在透析后仍保留50-90％的原始活性。对透析过的未加酶的试验化合物溶液也进行评价，以确保化合物是可透析的。
如果在透析后酶的活性不恢复，那么确定为该试验化合物是共价结合的(不可逆抑制)如果透析后大部分酶的活性恢复，那么该试验化合物是非共价结合的(可逆抑制)。共价结合的确定可以用恢复活性％来表示，该恢复活性％用下列公式，用透析前和透析后的抑制％来计算恢复活性％＝[(抑制％{透析前}-抑制％{透析后})/抑制％{透析前}]×100
恢复活性％值接近100％显示非共价结合(可逆抑制)。恢复活性％值低于100％很多显示共价结合(不可逆抑制)。下面表2提供了由本发明典型化合物与EGF-R激酶共价结合的确定获得的结果。为了进行比较，表2也提供了N-(3-溴苯基)-6，7-二甲氧基-4-间二氮杂萘胺的结合数据。这种间二氮杂萘抑制剂已鉴定为EGF-R激酶潜在的抑制剂[Fry，D.W.，et al.，Science，265，1093(1994)；Rewcastle G.W.，et al.，J.Med. Chem.，38，3482(1995)和Bridges，A.J.，et al.，J. Med. Chem.，39，267，(1996)]，并且包括在欧洲专利申请566,226A1中。表2提供了对每种化合物进行多种独立评价的结果。
表2
与表皮生长因子受体激酶共价结合的确定化合物恢复活性％ 确定实施例4 20 11 17共价
(不可逆结合)实施例9 9 4共价
(不可逆结合)N-(3-溴苯基)-6，7-二甲氧基- 102 70 107 非共价4-间二氮杂萘胺 (可逆结合)
表2的结果表明，本发明化合物通过与位于酶上的氨基酸残基形成共价键，以不可逆方式抑制EGF-R激酶。在这方面，它们明显不同于诸如N-(3-溴苯基)-6，7-二甲氧基-4-间二氮杂萘胺之类的、以可逆方式结合的一般4-苯胺基间二氮杂萘。如下要描述的，这种本发明化合物和先前技术中一般的间二氮杂萘之间结合能力的区别，导致显著地提高生物学活性，因而产生更大的治疗上的实用性。
通过加入[3H]-胸腺嘧啶测定的细胞生长的抑制
对本发明典型化合物在体外抑制下述细胞系生长的能力进行评价。通过细胞在抑制剂存在下生长时，测定放射性标记的胸腺嘧啶掺入的减少来进行定量测定抑制。从美国典型培养物保藏中心，Rockville，MD获得A431和SKBR3细胞系。通过用活化的大鼠Neu癌基因转染NIH 3T3小鼠成纤维细胞获得Neu-3T3细胞。从Clonetics(San Diego，CA)获得NHEK细胞。细胞在含5％CO2空气的潮湿培养箱中按常规生长。这些细胞系依赖于受体酪氨酸激酶(为本发明化合物的靶)的配体-生长因子，这些细胞系有以下特征
A431 过量表达EGFR的人类表皮样癌细胞
Neu-3T3用活化的Neu癌基因转染的NIH 3T3细胞
NHEK 依赖EGF的正常人类表皮角化细胞
SKBR3 过量表达ErbB2基因的人类乳腺癌细胞
细胞系在下述适宜的培养基中生长A431 Dulbcco’s Modified Eagles Media，高葡萄糖，BRL/Gibco
(10％小牛血清(FBS)，谷酰胺，青霉素-链霉素)
Dulbcco，R.，Freeman，G.Virology 8，396(1959)。Neu-3T3Dulbcco’s Modified Eagles Media，高葡萄糖
(10％小牛血清，谷酰胺，青霉素-链霉素)SKBR3 Roswell Park Memorial Inatitute 1640W/GLU
(10％小牛血清，谷酰胺，青霉素-链霉素)
Moore，G.E.，Gemer，R.E.和Franklin，H.A.A.M.A.，
199，516(1967)。NHEK 角化细胞生长培养基，Clonetics
Boyce，S.T.和Ham，R.G.In vitro 17，239(Abstract No.
159)(1981)
将细胞以10,000细胞/孔接种到96孔板的完全培养基中，让其生长至对数期。在这个阶段完全培养基用含有0.5％FBS的培养基(10％FBS用于细胞生长)或缺乏表皮生长因子(EGF)的培养基(无血清培养基用于细胞生长)替换。在低血清(或缺乏EGF)培养基中过夜培养后，加入要评价的化合物，细胞在化合物存在下保持48-72小时。然后除去含有试验化合物的培养基并加回完全培养基。让细胞生长18小时，随后在[3H]胸腺嘧啶(在血清/EGF培养基中1mCi/ml)中培养4小时。细胞于37℃在0.5M NaOH中裂解至少30分钟，分析放射性。
下面表3中提供了细胞生长抑制的数据。IC50是还原加入的[3H]胸腺嘧啶所需试验化合物浓度的50％。至少测定三个不同浓度的要评价的试验化合物的抑制％，然后从剂量对应曲线评价IC50值。用下面的公式评价抑制％
抑制％＝100-[CPM(药物)/CPM(对照)]×100
其中CPM(药物)的单位为每分钟计数、表示细胞在试验化合物存在下生长时，用液闪计数测定的加到DNA中的[3H]胸腺嘧啶的量。CPM(对照)是以每分钟计数为单位的、表示细胞在缺乏试验化合物的情况下生长时，用液闪计数测定的加到DNA中的[3H]胸腺嘧啶的量。
表3
通过加入[3H]胸腺嘧啶测定的细胞生长的抑制
化合物 A431 SKBR3 NHEKNEU-
(μM) (μM) (μM) 3T3
(μM)
实施例4 0.07＞50 0.17 ＞50
实施例5 0.825 0.30 0.17 10
实施例6 27 ＞50 4.5＞50
实施例7 0.455.5 0.45 7.5
实施例8 0.2270.50.3
实施例9 0.011 1.0570.002 0.002
实施例10 60 ＞50 ＞50 15
实施例11 0.8 40.85 0.4
人类表皮样肿瘤(A431)生长的体内抑制
BALB/c nu/nu雌性小鼠(Charles River，Wilmington，MA)用于体内标准药理学试验步骤。人类表皮样癌细胞A-431(美国典型培养物保藏中心，Rockville，Maryland#CRL-155)按上述在体内生长。给小鼠皮下注射一个单位的5×106细胞。当获得100-150mg的肿瘤块时，将小鼠随机地分为不同的处理组(第0天)。小鼠或者在处理后第1、5和9天或者在第1-10天，每天一次用含有或者80mg/kg/剂量、40mg/kg/剂量或者20mg/kg/剂量的要评价化合物的0.2％Klucel，进行腹膜内治疗。对照动物不接受药物。在处理后的28天中每7天测定肿瘤块[(长度×宽度2)/2]。对每一处理组测定相对肿瘤生长(第7、14、21和28天的平均肿瘤块除以第0天的平均肿瘤块)。用处理组相对肿瘤生长除以安慰组的相对肿瘤生长，再乘上100来确定T/C％(肿瘤/对照)。如果化合物的T/C％≤42％，则认为该化合物有活性。
将获得的实施例9化合物的抑制结果示于表4中。
表4
实施例9化合物在小鼠中对人类表皮样肿瘤生长的体内抑制
a)在第1、5、9*天或第1-10天**腹膜注射的药物。
d)S/T＝存活数/处理数(肿瘤处理后第28天)
下面表5比较了实施例9化合物和N-(3-溴苯基)-6，7-二甲氧基-4-间二氮杂萘胺体内抑制人类表皮样肿瘤(A431)生长的能力。由于N-(3-溴苯基)-6，7-二甲氧基-4-间二氮杂萘胺被鉴定为EGF-R激酶的潜在抑制剂[Fry，D.W.，et al.，Science，265，1093(1994)；Rewcastle G.W.，et al.，J.Med.Chem.，38，3482(1995)；Bridges，A.J.，et al.，J.Med.Chem.，39，267(1996)]，并且包括在欧洲专利申请566,226A1中，所以将该间二氮杂萘抑制剂选为比较化合物。
表5实施例9化合物和N-(3-溴苯基)-6，7-二甲氧基-4-间二氮杂萘胺对人类表皮样肿瘤在小鼠体内生长抑制的比较。剂量为20mg/kg/剂量，IP
a)在第1-15天腹膜注射的药物。
d)S/T＝存活数/处理数(肿瘤处理后第28天)。
如表4-5所示，本发明化合物体内抑制人类肿瘤在哺乳类动物中的生长，因此可用作抗肿瘤药物。在这一方面，它们明显不同于诸如N-(3-溴苯基)-6，7-二甲氧基-4-间二氮杂萘胺之类的缺乏抗肿瘤活性的4-苯胺基间二氮杂萘。
将实施例9化合物抑制人类表皮样肿瘤生长的能力与两种结构相似的化合物进行比较，这两种化合物是N-[4-[(3-甲苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-7-氟-2-丙烯酰胺(称为比较物A)和N-[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-丁酰胺(称为比较物B)，分别包括在欧洲专利申请635,488A1和566,226A1中。这些比较结果示于表6和表7中。
表6实施例9化合物和N-[4-[(3-甲苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-7-氟-2-丙烯酰胺(比较物A)对人类表皮样肿瘤(A431)在小鼠中生长体内抑制的
比较。a)腹膜注射的药物。对照和在第1、5和9天注射80mg/kg/剂量；在第1-10天注射20mg/kg/剂量。
d)S/T＝存活数/处理数(肿瘤处理后第28天)。*显示统计显著性p＜0.01。
表7实施例9化合物和N-[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-丁酰胺(比较
物B)对人类表皮样肿瘤(A431)在小鼠中生长体内抑制的比较。a)腹膜注射的药物。对照和在第1、5和9天注射80mg/kg/剂量；在第1-10天注射20mg/kg/剂量。
d)S/T＝存活数/处理数(肿瘤处理后第28天)。*显示统计显著性p＜0.01。
表6和表7中获得的结果表明，实施例9化合物-本发明典型化合物显著地(p＜0.01)抑制人类表皮样肿瘤的体内生长。欧洲专利申请635,488A1(比较物A)和566,226A1(比较物B)的结构最相近的化合物的活性实质上低于实施例9化合物的活性，在两个剂量的试验中都不能显著地减少肿瘤的生长。
根据本发明典型化合物获得的结果，本发明的化合物在治疗肿瘤、抑制肿瘤的生长或根除肿瘤方面特别有用。特别是，本发明的化合物在治疗表达EGFR的肿瘤、抑制其生长或根除这些肿瘤方面特别有用，这些肿瘤有乳腺、肾、膀胱、口腔、喉、食道、胃、结肠、卵巢或肺的肿瘤。
本发明化合物可以巧妙地配制药剂，或可以与一种或多种药学上可接受的载体例如溶剂、稀释剂等一起给药，并且可以以片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒，或含有例如大约0.05-5％悬浮剂的悬浮液、含有例如大约10-50％糖的糖浆、含有例如大约20-50％乙醇的酏剂等形式口服，或以无菌注射溶液的形式或在等渗介质中含有大约0.05-5％悬浮药物的悬浮液胃肠外给药。这类药物制剂可以与载体混合，含有例如大约0.05％至大约90％的活性成分，通常为大约5-60％(重量)。
使用的活性成分的有效剂量可以根据具体使用的化合物、给药模式和要治疗条件的严重性而改变。然而，一般来讲，本发明化合物给药的日剂量为大约0.05mg/kg至大约1000mg/kg动物体重，可选地一天分两次或四次或以持续释放形式给药时，可获得满意的结果。对大多数大型哺乳类动物来讲，总的日剂量为1-1000mg，最好为大约2-500mg。适用于内部使用的剂量形式在与固态或液态药学上可接受的载体的最终混合物中含有大约0.5-1000mg活性化合物。可以调整该剂量制度，以提供最佳治疗效应。例如，每日可给几个分割的剂量或剂量可以根据显示的治疗情况的紧急状态按比例减少。
这些活性化合物可以口服，也可以静脉内、肌内或皮下途径给药。固体载体包括淀粉、乳糖、磷酸钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液体载体包括无菌水、聚乙二醇、非离子表面活性剂和诸如玉米油、花生油和芝麻油之类的食用油，根据活性成分的性质和所需具体给药形式进行择。在带有药物成分的制剂中惯常使用的助剂比较有利的是包括诸如调味剂、颜料、防腐剂和抗氧化剂例如维生素E、维生素C、BHT和BHA之类的助剂。
从容易制备和容易给药的角度看，推荐的药物成分是固体成分，特别是片剂和装固体或装液体的胶囊。最好是口服化合物。
在某些情况下，可能需要以气雾剂的形式直接对导气管用化合物。
这些活性成分也可以胃肠外给药或腹膜内给药。这些作为游离碱或药物上可接受盐的活性化合物溶液或悬浮液，可以在水中适当地与诸如羟丙基纤维素之类的表面活性剂混合来制备。分散体也可以在丙三醇、液态聚乙二醇和其混合物在油中制备。在一般贮藏条件和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物生长。
适用于注射的药物形式包括无菌水溶液或分散体，以及用于临时制备的无菌注射溶液或分散体的无菌药粉。在所有情况下，药物形式必须是无菌的并且是流体，从而易于注射。它在生产和贮藏条件下必须是稳定的，并且必须是防腐的，以防止诸如细菌或真菌之类的微生物的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇(即甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、它们适宜的混合物和植物油。
对于癌的治疗，本发明化合物可以与其它抗肿瘤物质或与放射治疗一起给药。这些其它物质或放射治疗可以与本发明化合物同时使用或不同时间使用。这些结合的治疗可能协同作用，引起功效的提高。例如，本发明化合物可以与诸如taxol、长春碱之类的有丝分裂抑制剂，诸如cisplatin或cyclophosamide之类的烷化剂，诸如5-氟尿嘧啶或羟基脲之类的抗代谢物，诸如阿霉素、博莱霉素之类的DNA嵌入剂，诸如依托泊苷或喜树碱之类的拓扑异构酶抑制剂和诸如他莫昔芬之类的抗雌激素一起使用。
下面描述了本发明化合物制备的典型实施例。
实施例1
N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲基甲脒
将40.8g部分的5-硝基-氨基苯甲腈和40ml N，N-二甲基甲脒二甲基乙缩醛蒸汽浴加热2小时。减压除去溶剂，用二氯甲烷吸收残留物。溶液通过酸式硅酸镁后，除去溶剂。用乙醚洗涤后，得到50.8g N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲基甲脒。
实施例2
N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-间二氮杂萘胺
将含有23.74ml 3-溴苯胺和40.5g N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲基甲脒的100ml冰醋酸溶液进行搅拌，并在148℃油浴加热1.5小时。冷却时，过滤生成的固体，定量产生N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-间二氮杂萘胺熔点＝267-270℃；质谱(m/e)345。
实施例3
N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺
将含有34.5g N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-间二氮杂萘胺和16.8g铁粉的150ml乙醇和150ml冰醋酸混合物，在120℃油浴中加热2小时。过滤固体后，将固体碳酸钠加入滤液中，产生固体。将其过滤，用甲醇提取固体。提取液用木炭处理，蒸发为固体。用乙醚洗涤固体后，得到27.5gN-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺质谱(m/e)315。
实施例4
4-[[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸
将15ml吡啶加入1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺和0.6g马来酸酐中。搅拌过夜后，在旋转式蒸发器中除去溶剂。用大约400ml热乙醇吸收固体，过滤不溶性物质，产生0.33g 4-[[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸质谱(m/e)M+H 413，415。
实施例5
4-[[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸乙酯
将含有N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的15ml吡啶溶液冰浴冷却，滴加含有1.22g乙基富马酰氯的10ml二氯甲烷溶液。搅拌1.5小时后，让反应达到室温。减压除去溶剂，残留物用水处理。过滤红色固体，将其提取到热丙酮中。将不溶性物质过滤后，将滤液浓缩产生0.45g 4-[[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸乙酯熔点＝259-263℃，质谱(m/e)M+H 441，443。
实施例6
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-3-甲基-2-丁烯酰胺
将含有1.58g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的15ml吡啶溶液冰浴冷却，滴加含有0.67ml 3，3-二甲基丙烯酰氯的7ml乙醚溶液。在搅拌和冷却2小时后，减压除去溶剂。残留物用水处理，生成的固体用甲基溶纤剂重结晶，产生0.97g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-3-甲基-2-丁酰胺熔点＝300-301℃，质谱(m/e)396，398。
实施例7
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-(E)-2-丁烯酰胺
将含有1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的15ml吡啶溶液冰浴冷却，滴加含有0.57ml反式巴豆酰氯的6ml乙醚溶液。在搅拌和冷却2小时后，减压除去溶剂。残留物用水处理，生成的固体用正丁醇重结晶，产生0.69g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-(E)-2-丁烯酰胺熔点＝153-160℃，质谱(m/e)M+H 383，385。
实施例8
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-甲基-2-丙烯酰胺
将含有1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的15ml吡啶溶液冰浴冷却，滴加含有0.59ml异丁烯酰基氯的6ml醚溶液。在搅拌和冷却2小时后，减压除去溶剂。残留物用水处理，用正丁醇吸收生成的固体，再将乙醚加入冷却的溶液中，产生0.44g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-甲基-2-丙烯酰胺熔点＝40-245℃，质谱(m/e)M+H 383，385。
实施例9
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺
将含有0.50g 2-丁炔酸的10ml四氢呋喃溶液冰浴冷却。在加入0.79ml氯甲酸异丁酯后，加入0.66ml N-甲基吗啉。大约1分钟后，加入含有1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的10ml吡啶溶液。让反应达到室温并搅拌过夜。减压除去溶剂后，将固体用正丁醇重结晶，产生1.07g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺质谱(m/e)381，383。
实施例10
4-[[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸
将2.5ml 10N氢氧化钠溶液加入含有2.3g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸乙酯(实施例5)的25ml乙醇中。搅拌1小时后，加入2.1ml浓盐酸，反应搅拌另外2小时。生成的固体从正丁醇中重结晶，产生0.97g 4-[[4-(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸质谱(m/e)M+H 413。
实施例11
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2，4-己二烯酰胺
将含有0.67g 2，4-己二烯酸的10ml四氢呋喃溶液冰浴冷却。在加入0.79ml氯甲酸异丁酯后，加入0.66ml N-甲基吗啉。大约1分钟后，加入含有1.6gN-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的10ml吡啶溶液。让反应达到室温并搅拌过夜。减压除去溶剂后，将固体重结晶，产生1.0gN-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2，4-己二烯酰胺熔点＝258-260℃。
实施例12
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-环戊烯酰胺
将含有0.43g 2-环戊烯酸的5ml四氢呋喃溶液冰浴冷却。在加入0.49ml氯甲酸异丁酯后，加入0.41ml N-甲基吗啉。大约1分钟后，加入含有1.0g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的10ml吡啶溶液。让反应达到室温并搅拌过夜。再加入0.5N混合酸酐，混合物搅拌5小时。减压除去溶剂后，固体通过硅胶色谱纯化，产生0.30g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-环戊烯酰胺质谱(m/e)409(M+H，EI)。
实施例13
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丙烯酰胺
将含有2.0g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的10ml吡啶溶液冰浴冷却，在0℃滴加含有0.61ml丙烯酰氯的30ml乙醚溶液。在室温搅拌3.5小时后，减压除去溶剂。残留物用色谱纯化，产生0.2g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丙烯酰胺质谱(m/e)M+H 369。
实施例14
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)
将含有0.93g 3-苯基-2-丙炔酸的10ml四氢呋喃溶液冰浴冷却。在加入0.82ml氯甲酸异丁酯后，加入0.69ml N-甲基吗啉。大约1分钟后，加入含有1.0g N-(3-溴苯基)-4，6-间二氮杂萘胺的7ml吡啶溶液。在0℃反应1小时。减压除去溶剂后，固体通过硅胶色谱纯化，产生0.01gN-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)质谱(m/e)443.2，445.2(M+H，电喷淋)。
实施例15
6-氨基-4-氯间二氮杂萘
将含有3.25g 4-氯-6-氮间二氮杂萘、10.8g亚硫酸氢钠和0.3g相转移催化剂(C8H17)3NCH3+Cl-的97ml四氢呋喃和32ml水的混合物快速搅拌2小时，混合物用乙醚稀释，分离有机层。有机溶液用盐水洗涤，并通过硫酸镁干燥。溶液通过小的硅胶柱。在30℃减压除去溶剂，产生6-氨基-4-氯间二氮杂萘，它可用于下一个步骤而无需进一步纯化。
实施例16-2-丁炔酰胺
将含有1.64g 2-丁炔酸的46ml四氢呋喃溶液冰浴冷却。在加入2.34ml氯甲酸异丁酯后，加入4.13ml N-甲基吗啉。大约10分钟后，将其注入含有6-氨基-4-氯间二氮杂萘的46ml四氢呋喃溶液中。混合物在室温下搅拌2小时，将混合物注入盐水和碳酸氢钠的混合物中，用乙醚提取。通过硫酸镁干燥除去乙醚溶剂并过滤。除去溶剂，产生[4-氯-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺有色油，它用于下一个步骤而无需进一步纯化。
实施例17
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺
将含有1.76g[4-氯-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺和1.23g 3-溴苯胺的溶液在23ml异丙醇的惰性气氛中回流40分钟。将混合物冷却至室温，加入200ml乙醚，产生作为盐酸盐的N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺。用碳酸氢钠溶液进行中和，用乙酸乙酯提取，除去溶剂，用1-丁醇重结晶，产生作为游离碱的N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺。
实施例18
N’-(4-氨基-2-氰基苯基)-N，N-二甲基甲脒
将含有6.0g(27.5mmol)N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲基甲脒、33.9g(41.8ml，412.4mmol)环己烯和0.6g 10％Pd/C的360ml甲醇溶液回流4小时。热的混合物通过Celite过滤。除去溶剂，将残留物氯仿-四氯化碳重结晶，产生4.9g(95％)N’-(4-氨基-2-氰基苯基)-N，N-二甲基甲脒的浅灰色结晶固体。质谱(m/e)188.9(M+H，电喷淋)。
实施例19
N-[3-氰基-4-[[(二甲基氨基)亚甲基]氨基]苯基]-2-丁炔酰胺
将含有2.01g(23.9mmol)2-丁炔酸和2.9ml(22.3mmol)氯甲酸异丁酯的30ml四氢呋喃溶液在0℃氮下进行搅拌，用3分钟以上的时间加入2.42g(2.63ml，22.3mmol)N-甲基吗啉。搅拌15分钟后，用4分钟以上的时间加入含有N’-(4-氨基-2-氰基苯基)-N，N-二甲基甲脒和1.6g(1.75ml，15.9mmol)N-甲基吗啉的25ml四氢呋喃溶液。混合物在0℃搅拌30分钟并在室温下搅拌30分钟。混合物用70ml乙酸乙酯稀释，并注入盐水和饱和碳酸氢钠的混合物中。将有机层干燥(MgSO4)并通过硅胶垫过滤，除去溶剂，用50ml乙醚搅拌残留物。收集悬浮的固体，产生3.61g(89％)白色固体。质谱(m/e)255.0(M+H，电喷淋)。
实施例20
N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺
将含有3.0g(11.8mmol)N-[3-氰基-4-[[(二甲基氨基)亚甲基]氨基]苯基]-2-丁炔酰胺和2.23g(12.98mmol)3-溴苯胺的18ml醋酸溶液在氮下缓慢搅拌、回流1小时15分钟。混合物冰浴冷却，形成固体块。通过过滤收集固体，用乙醚-乙腈1∶1洗涤，产生一黄色固体，将其从乙醇中重结晶，产生2.51g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺质谱(m/e)381，383。
权利要求
1.下式化合物或其药学上可接受的盐
其中
X是苯基，它可选地被一个或多个选自卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、氮、羧基、2-7个碳原子的烷酯基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳原子的烷醇氨基的取代基取代；
R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基或三氟甲基；
R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基；
Y是选自以下的原子团
R3独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷酯基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基；
n＝2-4；
但须Y的每个R3可以相同或不同。
2.按照权利要求1的化合物，其中R、R1和R2是氢或其药学上可接受的盐。
3.按照权利要求2的化合物，其中X是未取代的或被卤素或1-6个碳原子的烷基取代的。
4.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丁炔酰胺或其药学上可接受的盐。
5.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-甲基-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐。
6.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2，4-己二烯酰胺或其药学上可接受的盐。
7.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-(E)-2-丁烯酰胺或其药学上可接受的盐。
8.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-3-甲基-2-丁烯酰胺或其药学上可接受的盐。
9.按照权利要求1的化合物，为4-[[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸或其药学上可接受的盐。
10.按照权利要求1的化合物，为4-[[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸或其药学上可接受的盐。
11.按照权利要求1的化合物，为4-[[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸乙酯或其药学上可接受的盐。
12.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-环戊烯酰胺或其药学上可接受的盐。
13.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐。
14.按照权利要求1的化合物，为N-[4-[3-(溴苯基)氨基]-6-间二氮杂萘基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)或其药学上可接受的盐。
15.哺乳类的异常蛋白酪氨酸激酶生物学效应的抑制方法，它包括对所述的哺乳类给予有效量的具有下式的化合物或其药学上可接受的盐
其中
X是苯基，它可选地被一个或多个选自卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、氮、羧基、2-7个碳原子的烷酯基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳原子的烷醇氨基的取代基取代；
R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基或三氟甲基；
R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基；
Y是选自以下的原子团
R3独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷酯基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基；
n＝2-4；
但须Y的每个R3可以相同或不同。
16.在哺乳类中治疗肿瘤、抑制肿瘤生长或根除肿瘤的方法，它包括对所述的哺乳类给予有效量的具有下式的化合物或其药学上可接受的盐
其中
X是苯基，它可选地被一个或多个选自卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、氮、羧基、2-7个碳原子的烷酯基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳原子的烷醇氨基的取代基取代；
R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基或三氟甲基；
R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基；
Y是选自以下的原子团
R3独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷酯基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基；
n＝2-4；
但须Y的每个R3可以相同或不同。
17.按照权利要求15的方法，其中肿瘤表达EGFR。
18.按照权利要求16的方法，其中肿瘤有乳腺、肾、膀胱、口腔、喉、食管、胃、结肠、卵巢或肺的肿瘤。
19.包含下式化合物或其药学上可接受的盐的药用组合物
其中
X是苯基，它可选地被一个或多个选自卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、氮、羧基、2-7个碳原子的烷酯基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳原子的烷醇氨基的取代基取代；
R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基或三氟甲基；
R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基；
Y是选自以下的原子团
R3独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷酯基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基；
n＝2-4；
或其药学上可接受的盐，但须Y的每个R3可以相同或不同。
20.具有下式的化合物的生产方法
其中R、R1、R2和X如权利要求1所述；Y’是选自以下的原子团
其中每个R’3独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷酯基、苯基、或2-7个碳原子的烷基羰基；n是2-4的整数，其特征在于，包括将具有下式的邻氨基苯甲腈
用二甲基甲酰胺二甲基乙酯与或不与溶剂一起处理，产生具有下式的化合物
在酸性有机溶剂中，将所述化合物与具有下式的苯胺一起加热
X-NH2
产生具有下式的6-硝基-间二氮杂萘
用还原试剂处理所述化合物，产生具有下式的6-氨基-间二氮杂萘
用具有下式的酰基氯或混合酸酐处理所述化合物
和
其中R4是1-6个碳原子的烷基。
21.具有下式的化合物的生产方法
其中R、R1、R2和X如权利要求1所述，而(Z)表示双键的构型，其特征在于，包将下式化合物
在惰性溶剂中，在有机碱存在下与具有下式的环酐反应
其中每个R5独立地是氢、苯基、或1-6个碳原子的烷基。
22.具有下式的化合物的生产方法
其中X如权利要求1所述；Y’如权利要求20所述，
该方法包括将具有下式的化合物
在含有惰性有机溶剂和水的溶剂混合物中，用亚硫酸氢钠和相转移催化剂还原，产生具有下式的化合物
将所述的化合物与具有下式的酰基氯或混合酸酐反应
或
其中R4是1-6个碳原子的烷基，在胺碱的存在下，在惰性溶剂中产生具有下式的化合物
然后将所述化合物在惰性溶剂中与具有下式的苯胺一起加热
X-NH2
23.具有下式的化合物的生产方法
其中X如权利要求1所述；Y’如权利要求20所述，
该方法包括将具有下式的化合物
在惰性溶剂中用钯催化剂和氢源还原，产生具有下式的化合物
将所述的化合物与具有下式的酰基氯或混合酸酐反应
或
其中R4是1-6个碳原子的烷基，在胺碱的存在下，在惰性溶剂中产生具有下式的化合物
然后将所述化合物在酸性溶剂中与具有下式的苯胺一起加热
X-NH 全文摘要
本发明提供下式化合物或其药学上可接受的盐(其中各符号定义见说明书)。它们可用作抗肿瘤药物。
文档编号A61P43/00GK1161330SQ97101099
公开日1997年10月8日 申请日期1997年2月4日 优先权日1996年2月5日
发明者A·维斯纳, B·D·约翰逊, M·B·小弗洛伊德, D·B·基钦 申请人:美国氰胺公司