抗β-淀粉样肽抗体及其使用方法

专利名称：抗β-淀粉样肽抗体及其使用方法
技术领域：
本发明涉及抗￠-淀粉样肽抗体。本发明还涉及此类抗体在治疗和/或预防疾病，例如阿尔茨海默氏病中的用途。关于联邦政府资助的研究或开发的声明不适用。
背景技术：
阿尔茨海默氏病(AD)是退行性脑病变，其临床特征在于进行性的记忆缺损、混舌L、逐渐身体恶化，以及最终死亡。全球大约一千五百万人患有阿尔茨海默氏病，预期该数目将随着人类寿命的延长而急剧地增加。组织学上，该疾病的特征在于主要出现在联络皮层、边缘系统和基底神经节中的神经炎性斑块(neuritic plaque)。这些斑块的主要成分是^ -淀粉样肽(A P )，该肽是P淀粉样前体蛋白(P APP或APP)的切割产物。APP是I型跨膜糖蛋白，含有一个大的异位N端域、一个跨膜域和一个小的胞质C端尾。染色体21上的APP单基因的转录物的可变拼接导致具有不同氨基酸数目的几种同种型。似乎在阿尔茨海默氏病的神经病理学上具有主要作用。该疾病的家族形式已经与APP及早老素(presenilin)基因中的突变联系起来(Tanzi等，1996, Neurobiol.Dis. 3 :159-168 ；Hardy, 1996，Ann. Med. 28 :255-258)。这些基因中的疾病相关突变导致 A 3的42氨基酸形式——淀粉样蛋白斑中发现的主要形式——的产生增加。而且，用人A3免疫过表达APP的疾病相关突变形式的转基因小鼠，减轻了斑块负担及相关病理(Schenk等，1999, Nature, 400 :173-177 ；W0 99/27944)，并且外周施用抗A P抗体也降低脑中的斑块负担(Bard 等，2000，Nature Medicine 6(8) :916-919 ；W02004/032868 ；W0 00/72880)。已经有报道，Fe介导的小胶质细胞和/或巨噬细胞的吞噬作用对于体内斑块的清除过程是重要的。Bard 等，Proc. Natl. Acad. Sc i. USA 100:2023-2028(2003)。然而，也有报道，在通过免疫疗法体内清除P淀粉样肽中涉及非Fe介导的机制。Bacskai等，J. Neurosci. 22 :7873-7878 (2002) ；Das 等，J. Neurosci. 23 :8532-8538 (2003)。因此，抗体疗法提供了一种有希望的治疗和预防阿尔茨海默氏病的方法。然而，使用包括々0 1-42的疫苗进行的人类临床试验由于一些患者中的脑膜脑炎而被暂停。Orgogozo 等，Neruology 61:7-8(2003) ;Ferre;r 等 Brain Pathol. 14 :11-20 (2004)。已经报道，在表现出与人AD脑中观察到的相似的年龄相关性淀粉样蛋白斑发生以及神经变性和脑淀粉样血管病(CAA)的转基因小鼠中，使用N端特异的抗AP抗体实施被动免疫，导致大部分弥散的淀粉样蛋白的显著减少，但诱导脑微出血频率增加。Pfeifer等，Science298:1379(2002)。已经提示，在APP转基因小鼠中，由抗P淀粉样肽抗体的被动免疫引起的脑淀粉样血管病(C从)相关性微出血的加剧，依赖于抗体对P淀粉样肽的沉积形式的识别。Racke等，J. Neurosci. 25 :629-636 (2005)。为了减少发生炎症的风险，已经提议用缺乏Fe区的抗淀粉样蛋白沉积物的肽成分的抗体被动免疫。WO 03/086310。仍然需要具有改善的效果和安全谱并且适用于人类患者的、针对AP的抗体和其它免疫治疗剂。在本申请中引用了各种出版物(包括专利和专利申请)。这些出版物的公开内容特此完整地并入作为参考。发明概述在此公开的本发明涉及与AP肽C端结合的抗体和多肽。一方面，本发明提供与A P !-40> A ^ H2和A P !_43结合的抗体或多肽，其中所述抗体或多肽以比其结合A ^ H2和A ^ !_43的亲和力更高的亲和力与AP L结合，而且其中所述抗体或多肽与AP ^上包括第25-34和40位氨基酸的表位结合。一些实施方案中，抗体与AP ^结合的亲和力是其与A^ !_42和/或AP卜43结合的亲和力的至少大约40倍。一些实施方案中，所述抗体不是抗体2294。另一方面，本发明提供抗体6G(可以与术语“6G”互换)。6G的重链和轻链可变区的氨基酸序列显示在图I中。抗体6G的互补决定区(OTR)部分(包括Chothia和KabatOTR)也显示在图I中。另一方面，本发明还提供具有表3所示氨基酸序列的6G的抗体变体。另一方面，本发明提供包含抗体6G或表3所示的其变体的片段或区域的抗体。一个实施方案中，所述片段是抗体6G的轻链。另一实施方案中，所述片段是抗体6G的重链。再一实施方案中，所述片段包含来自抗体6G轻链和/或重链的一个或多个可变区。再一实施方案中，所述片段包含来自图I所示轻链和/或重链的一个或多个可变区。再一实施方案中，所述片段包含来自抗体6G轻链和/或重链的一个或多个⑶R。另一方面，本发明提供包含以下项目中的任意一个或多个的多肽(其可以是或者可以不是抗体)a)抗体6G或其显示在表3中的变体的一个或多个CDR ;b)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的重链的CDR H3 ；c)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链的CDR L3 ；d)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链的3个CDR ；e)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的重链的3个CDR ；f)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链的3个⑶R以及来自抗体6G或其显示在表3中的变体的重链的3个⑶R。本发明还提供包含以下项目中的任意一个或多个的多肽(其可以是或者可以不是抗体)a)衍生自抗体6G或其显示在表3中的变体的一个或多个(一个、两个、三个、四个、五个或六个)CDR ;b)衍生自抗体6G重链⑶R H3的⑶R ;和/或c)衍生自抗体6G轻链⑶R L3的⑶R。一些实施方案中，所述⑶R是图I中所示的⑶R。一些实施方案中，所述衍生自抗体6G或其显示在表3中的变体的一个或多个CDR与6G或其变体的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个⑶R有至少大约85%、至少大约86%、至少大约87%、至少大约88%、至少大约89%、至少大约90%、至少大约91%、至少大约92%、至少大约93%、至少大约94%、至少大约95%、至少大约96%、至少大约97%、至少大约98%或至少大约99%的同一性。一些实施方案中，所述⑶R是Kabat⑶R。一个实施方案中，所述⑶R是Chothia⑶R。其它实施方案中，所述⑶R是Kabat及Chothia⑶R的组合(也称作“组合⑶R”或“扩展⑶R”)。换言之，对于包含一个以上⑶R的任何给定的实施方案，这些⑶R可以是选自Kabat、Chothia和/或组合 ⑶R的任何⑶R。一些实施方案中，本发明抗体是人抗体。其它实施方案中，本发明抗体是人源化抗体。一些实施方案中，抗体是单克隆的。一些实施方案中，抗体(或多肽)是分离的。一些实施方案中，抗体(或多肽)是实质上纯的。抗体重链恒定区可以来自任何类型的恒定区，例如IgG、IgM、IgD、IgA和IgE ;以及任何同种型，例如，IgGU IgG2、IgG3和IgG4。一些实施方案中，本文所述抗体或多肽具有被受损的效应子功能。一些实施方案中，抗体或多肽包含具有受损的效应子功能的重链恒定区，其中所述重链恒定区包含Fe区。一些实施方案中，Fe区中的N-糖基化被去除。一些实施方案中，Fe区在N-糖基化识别序列中包含突变，由此该抗体或多肽的Fe区不发生N-糖基化。一些实施方案中，Fe区被PEG化。一些实施方案中，抗体或多肽的重链恒定区是含有以下突变的人重链IgG2a恒定区A330P331至S330S331 (氨基酸编号参照野生型IgG2序列进行)。一些实施方案中，抗体或多肽包含含有如下突变的IgG4恒定区E233F234L235至P233V234A235。这些氨基酸位置Kabat编号方式为基础。另一方面，本发明提供包含编码抗体6G或其显示在表3中的变体的片段或区域的多核苷酸的多核苷酸(其可以是分离的)。一个实施方案中，所述片段是抗体6G的轻链。另一实施方案中，所述片段是抗体6G的重链。再一实施方案中，所述片段含有来自抗体6G的轻链和/或重链的一个或多个可变区。再一实施方案中，所述片段包含来自抗体6G的轻链和/或重链的一个或多个(即，一个、两个、三个、四个、五个、六个)互补决定区(CDR)。另一方面，本发明是包含编码抗体6G或其在表3中所示的变体的多核苷酸的多核苷酸(其可以是分离的)。一些实施方案中，所述多核苷酸包含SEQ ID NO :9和SEQ IDNO 10中所示多核苷酸之一或两者。另一方面，本发明提供编码本文所述任何抗体(包括抗体片段)或多肽的多核苷酸。另一方面，本发明提供包含本文所述任何多核苷酸的载体(包括表达和克隆载体)和宿主细胞。另一方面，本发明是包含编码本文所述任何抗体的多核苷酸的宿主细胞。另一方面，本发明是AP卜4(|与抗体6G或其在表3中显示的变体结合的复合物。另一方面，本发明是A P ^与本文所述任何抗体或多肽结合的复合物。另一方面，本发明是包含有效量的任何本文所述抗体、多肽或多核苷酸以及药物可接受赋形剂的药物组合物。一些实施方案中，所述抗体或多肽包含抗体6G的一个或多个CDR。另一方面，本发明是制备抗体6G的方法，包括在允许抗体6G产生的条件下培养宿主细胞或其后代，其中所述宿主细胞包含编码抗体6G的表达载体；和，在一些实施方案中，纯化该抗体6G。一些实施方案中，表达载体包含SEQ ID NO :9和SEQ ID NO : 10中所示多核苷酸序列之一或两者。另一方面，本发明提供通过如下方式制备本文所述任何抗体或多肽的方法在适宜细胞中表达编码所述抗体(其可以分开表达为单独的轻链或重链，或者从一个载体既表达轻链也表达重链)或多肽的一种或多种多核苷酸，一般地随后回收和/或分离目的抗体或多肽。本发明也提供预防、治疗、抑制或延迟阿尔茨海默氏病及与改变的A3或e APP表达或者AP肽的累积有关的其它疾病发展的方法，其中所述其它疾病有例如Down氏综合症、帕金森病、多发性脑梗塞痴呆、轻度认知缺损、脑淀粉样血管病、抑郁、Creutzfeldt-Jakob病、伴有Lewy小体的痴呆和AIDS。该方法包括给个体施用有效剂量的包含本发明抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物。 本发明还提供在个体中延迟和阿尔茨海默氏病或与AP肽累积有关的其它疾病相关的症状发展的方法，包括给个体施用有效剂量的包含本发明抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物。本发明还提供抑制个体中淀粉样蛋白斑和/或淀粉样蛋白累积的形成的方法，包括给个体施用有效剂量的包含本发明抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物。一些实施方案中，淀粉样蛋白斑存在于个体的脑(脑组织)中。一些实施方案中，淀粉样蛋白斑存在于脑血管结构中。其它实施方案中，淀粉样蛋白累积出现在循环系统中。本发明还提供在个体中减少淀粉样蛋白斑和/或淀粉样蛋白累积的方法，包括给个体施用有效剂量的包含本发明抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物。一些实施方案中，淀粉样蛋白斑存在于个体的脑(脑组织)中。一些实施方案中，淀粉样蛋白斑存在于脑血管结构中。其它实施方案中，淀粉样蛋白累积出现在循环系统中。本发明还提供在个体中除去或清除淀粉样蛋白斑和/或淀粉样蛋白累积的方法，包括给个体施用有效剂量的包含本发明抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物。一些实施方案中，淀粉样蛋白斑存在于个体的脑(脑组织)中。一些实施方案中，淀粉样蛋白斑存在于脑血管结构中。其它实施方案中，淀粉样蛋白累积出现在循环系统中。此外，本发明还提供抑制AP肽在组织中累积的方法，包括使所述组织与本发明抗体或多肽接触。本发明也提供在个体中减少A 0肽(例如，可溶性的、寡聚体的和沉积的形式)的方法，包括给个体施用有效量的本发明抗体、多肽或多核苷酸。一些实施方案中，抑制和/或降低脑中AP肽的累积。一些实施方案中，抑制和/或降低AP肽的毒性作用。因此，本发明方法可以用于治疗其中存在或怀疑存在AP肽累积的任何疾病，例如，阿尔茨海默氏病、Down氏综合症、帕金森病、多发性脑梗塞痴呆、轻度认知缺损、脑淀粉样血管病、抑郁、Creutzfeldt-Jakob病或伴有Lewy小体的痴呆。本发明还提供在个体中改善认知功能或逆转与AP淀粉样蛋白沉积相关疾病(如，阿尔茨海默氏病)有关的认知衰退的方法，包括给个体施用有效剂量的包含本发明抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物。本文所述任何抗体、多肽或多核苷酸均可以用于本发明的方法。一些实施方案中，所述抗体是抗体6G。本发明抗体和多肽还可以用于检测、诊断和监测阿尔茨海默氏病及与改变的A3或3 APP表达有关的其它疾病，例如，Down氏综合症和AIDS。该方法包括使怀疑具有改变的八0或PAPP表达的患者的样本与本发明抗体接触，以及确定AP或PAPP的水平是否不同于对照或比较样本的水平。一些实施方案中，在给予抗A3抗体之前和之后测量血清
水平；并且评估血清AP水平的任何增加。本发明任何抗体或多肽的施用都可以通过本领域已知的任何方式进行，包括静脉内、皮下、通过吸入、动脉内、肌内、心内、心室内、胃肠外、鞘内、以及腹膜内。施用可以是全身性的，例如，静脉内，或局部的。一般地，这也适用于本发明的多肽和多核苷酸。另一方面，本发明提供包含本文所述任何一种或多种组合物的药盒及组合物。这些药盒通常在适宜的包装中并提供了适当的说明，可以用于本文所述任何方法中。附图简述

图1显示抗体6G的重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO 1)和轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO 2) o Kabat⑶R以粗体显示，Chothia⑶R以下划线显示。重链和轻链可变区的氨基酸残基顺序地编号。图2显示通过ELISA对抗体6G进行的表位作图。AP肽(1-16、1-28、17-40、17-42、22-35、28-40、28-42、1-38、1-40、1-42、1-43、和 33-40)固定于 ELISA 板上。单克隆抗体6G(20nM)与各种固定的肽温育I小时。使用HRP缀合的山羊抗人k 二抗测量与固定的A 3肽结合的抗体6G。图3显示通过ELISA对抗体6G进行的表位作图。将各种A P肽(序列从上到下被指定为SEQ ID NO 18-29)固定于ELISA板上。单克隆抗体6G与各种固定的肽温育I小时。使用HRP缀合的山羊抗人K 二抗测量与固定的AP肽结合的抗体6G。“NB”指未检测到结合。图4是显示AP上与抗体6G结合的表位的示意图。显示了 AP在淀粉样前体蛋白(APP)及APP的细胞膜部分中的相对位置。“CT99”指APP的C端99个氨基酸。所示氨基酸序列被指定为SEQ ID NO :30。图5是显示抗A ^ !_16的单克隆抗体(m2324)和抗体6G对APP表达细胞进行免疫染色的照片。顶图显示在细胞与m2324或6G(各5i!g/ml)温育以及使用Cy3缀合的山羊抗小鼠或抗人二抗检测结合后荧光显微镜下观察到的细胞。底图显示显微镜下观察到的细胞。图6显示通过ELISA对抗体2294和6G进行的表位作图。将各种A P肽(序列从上到下为SEQ ID N0:18-26、31及27-29)固定于ELISA板上。抗体与各种固定的肽温育I小时。使用HRP缀合的山羊抗人K 二抗测量与固定的AP肽结合的抗体6G。使用山羊抗小鼠抗体测量与固定的AP肽结合的抗体2294，其中所述山羊抗小鼠抗体能够既结合重链也结合轻链，是缀合了 HRP的二抗。“NB”指未检测到结合。在“2294”和“6G”下的列中的数字表示450nm的吸收值。发明详述此处公开的本发明提供与A P的C端结合的抗体和多肽。本发明还提供编码这些抗体和/或多肽的多核苷酸。本发明还提供制备和使用这些抗体和多肽的方法。本发明还提供通过给个体施用有效量的包含本文所述抗体、多肽或编码本文所述抗体或多肽的多核苷酸的药物组合物，治疗或预防个体中与￠-淀粉样蛋白沉积有关的疾病的方法，所述疾病有例如，阿尔茨海默氏病、Down氏综合症、多发性脑梗塞痴呆、轻度认知缺损、脑淀粉样血管病、抑郁、Creutzfeldt-Jakob病及伴有Lewy小体的痴呆。一般技术除非另有说明，否则本发明的实施将利用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些技术属于本领域技术的范围。这些技术在文献中有全面的说明，例如，Molecular Cloning A Laboratory Manual,第二版(Sambrook 等，1989)Cold Spring Harbor Press ；01igonucleotide Synthesis(M. J. Gait编，1984) ；Methods in Molecular Biology, Humana Press ；Cell Biology A LaboratoryNotebook(J. E. Cellis,编，1998)Academic Press ；Animal Cell Culture(R. I. Freshney,编，1987) !Introduction to Cell and Tissue Culture(J. P. Mather and P.E. Roberts,1998)Plenum Press ；Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,和 D.G.Newell 编，1993-1998)J.Wiley and Sons ；Methods inEnzymology(Academic Press, Inc.) ；Handbook of Experimental Immunology(D. M. Weir和 C. C. Blackwell,编)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. M. Miller 和M. P. Calos 编，1987) ；Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel 等，编 ，1987) ；PCR The Polymerase Chain Reaction(Mullis等编，1994) ；Current Protocols inImmunology (J. E. Coligan 等，编，1991) ；Short Protocols in Molecular Biology (Wileyand Sons,1999) ；Immunobiology (C. A.Janeway 和 P.Travers,1997) ；Antibodies(P.Finch,1997) ；Antibodies A practical approach(D. Catty.编，IRL Press,1988-1989)；Monoclonal antiboies a practical approach(P. Shepherd 和 C. Dean 编，OxfordUniversity Press,2000) ；Using antibodies a laboratory manual(E. Harlow andD. Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999) ；The Antibodies(M. Zanetti 和J. D. Capra 编，Harwood Academic Publishers, 1995)。定义“抗体”是能够通过至少一个抗原识别位点特异结合靶(例如糖、多核苷酸、月旨质、多肽等)的免疫球蛋白分子，其中所述抗原识别位点位于该免疫球蛋白分子的可变区中。本文中，该术语不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，也包括其片段(例如Fab，Fab’，F(ab’ )2,Fv)、单链(ScFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、以及包含抗原识别位点的该免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的构型(configuration)。本发明抗体包括任何类型的抗体，例如IgG，IgA或IgM(或其亚型)，该抗体不必是任何特定类型的。根据抗体重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以划分为不同的类型。有五大类的免疫球蛋白IgA，IgD, IgE, IgG和IgM，其中几种可以进一步细分成亚型(同种型)，例如，IgGl, IgG2，IgG3，IgG4, IgAl和IgA2。对应于不同类型的免疫球蛋白的重链恒定区被分别称作a、S、e、Y和U。不同类型的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是熟知的。本文中，“单克隆抗体”指从基本上均质的抗体群体(即，构成该群体的各个抗体，除了可能微量存在的可能的天然突变外，都是相同的)获得的抗体。单克隆抗体是高度特异的，指向单个抗原位点。而且，与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。修饰词“单克隆”指的是抗体获自基本上均质的抗体群的该特征，而不能理解为需要通过任何特定的方法来产生该抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过Kohler和Milstein, 1975,Nature 256 495最先描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过诸如美国专利4，816，567描述的重组DNA方法制备。单克隆抗体也可以从使用例如McCafferty等，1990，Nature，348 :552-554中描述的技术制备的噬菌体文库分离。本文中，“人源化”抗体指含有最少的源于非人免疫球蛋白的序列的非人(例如鼠)抗体形式，该抗体形式是特异的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链、或其片段(例如Fv，Fab，Fab’，F(ab’)2或抗体的其它抗原结合亚序列)。人源化抗体主要是人免疫球蛋白(受体抗体)，在该蛋白中来自该受体的互补决定区(CDR)的残基被来自具有期望特异性、亲和性和能力的、非人物种(供体抗体)例如小鼠、大鼠或兔的CDR的残基替换。一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基被相应的非人残基替换。而且，人源化抗体可以包含既不存在于受体抗体也不存在于引入的CDR或构架序列中但被包括在人源化抗体中以进一步改善和优化抗体的性能的残基。一般地，人源化抗体包含至少一个，以及典型地两个，可变区的基本上所有部分，其中全部或基本上全部的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，而全部或基本上全部的FR区是具有人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。最佳地，人源化抗体还将包含免疫球蛋白(典型地，人免疫球蛋白)的恒定区或域(Fe)的至少一部分。抗体可以具有按照WO 99/58572所述修饰的Fe区。其它人源化抗体形式具有相对于原始抗体发生了改变的一个或多个⑶R (—个、两个、三个、四个、五个、六个)，这些⑶R也被称作“衍生自”原始抗体的一个或多个⑶R的一个或多个⑶R。
本文中，“人抗体”指具有与人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体，和/或使用本领域已知的或本文所述的制备人抗体的任何技术制备的抗体。人抗体的该定义包括含有至少一条人重链多肽或至少一条人轻链多肽的抗体。一个这样的实例是包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。人抗体可以使用本领域已知的各种技术制备。一个实施方案中，从曬菌体文库选择人抗体，其中该曬菌体文库表达人抗体(Vaughan等1996, NatureBiotechnology, 14 :309-314 ；Sheets 等，1998，PNAS, (USA)95 :6157-6162 ；Hoogenboom 和Winter, 1991，J. Mol. Biol. 227 :381 ；Marks 等，1991，J. Mol. Biol. 222 :581)。人抗体也可以通过将人免疫球蛋白基因座引入转基因动物，例如，内源性免疫球蛋白基因已经部分或完全被失活的小鼠，而制备。该方法描述在美国专利5，545，807 ；5, 545,806 ;5，569，825 ；5，625，126 ;5，633，425和5，661，016中。或者，人抗体可以通过使产生抗靶抗原的抗体的人B淋巴细胞(该B淋巴细胞可以从个体回收或者可以已经在体外免疫)永生化而制备。见例如，Cole 等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)；Boerner 等，1991，J. Immunol. 147 ⑴ 86-95 ;和美国专利 5，750，373。本文中，术语“6G”和“抗体6G”可互换使用，指具有SEQ ID NO 11所示重链氨基酸序列和SEQ ID NO :12所示轻链氨基酸序列的抗体。图I中显示了重链和轻链可变区的氨基酸序列。图I中图解显示了抗体6G的⑶R部分(包括Chothia和Kabat OTR)。编码重链和轻链的多核苷酸显示在SEQ ID N0:13和SEQ ID N0:14中。6G的特征在实施例中描述。术语“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指任何长度的氨基酸聚合物。该聚合物可以是直链的或分支的，它可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。该术语也包括已经天然地或通过干预的方式被修饰的氨基酸聚合物；所述修饰有例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化、或任何其它操作或修饰，例如与标记成分缀合。该定义也包括例如，含有一个或多个氨基酸类似物(包括例如，非天然的氨基酸等)以及本领域已知的其它修饰的多肽。可以理解，由于本发明多肽是以抗体为基础的，故该多肽可以是单链形式或连接在一起的多条链的形式。“多核苷酸”或“核酸”在本文中可互换使用，指任何长度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基，和/或它们的类似物，或者是可以通过DNA或RNA聚合酶掺入聚合物中的任何底物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如，甲基化的核苷酸及它们的类似物。如果存在修饰的话，对核苷酸结构的修饰可以在聚合物组装之前或之后发生。核苷酸序列可以被非核苷酸成分中断。多核苷酸可以在聚合之后被进一步修饰，例如，与标记成分缀合。其它类型的修饰包括，例如，“带帽”、将一个或多个天然存在的核苷酸替换成类似物、核苷酸间的修饰，例如，不带电荷的键接(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、phosphoamidates、cabamates等)、带电荷的键接(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)、含有吊挂部分例如蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)、含有烷化剂、具有修饰的键接(例如，a异头核酸等)，以及这些多核苷酸的未修饰形式。而且，任何通常存在于糖中的羟基基团均可以被置换为例如膦酸基团、磷酸基团，被标准保护基保护、或被活化以预备与另外核苷酸的另外连接、或者可以缀合至固相支持物上。5’和3’端OH可以被磷酸化或者替代为胺或具有I至20个碳原子的有机封端基团部分。其它羟基也可以被衍生化为标准的保护基。多核苷酸也可以含有本领域通常已知的核糖或脱氧核糖的糖的类似形式，包括例如，2’ -0-甲基_、2’ -0-烯丙基、2’ -氟-或2’ -叠氮-核糖、碳环糖类似物、ct -异头糖、差向异构糖例如阿拉伯糖、木糖类或来苏糖类、吡喃糖类、呋喃糖类、景天庚酮糖类、无环类似物及脱碱基核苷类似物例如甲基核苷。可以将一个或多个磷酸二酯键替换成备选的连接基团。这些备选连接基团包括，但不限于，其中磷酸酯被p(0)s( “硫代酯”)、P(S)S( “二硫代酯”)、(0)NR2( “酰胺化*”)、P(0)R、P(0)0R’、C0*CH2( “formacetal”)替代的实施方案，其中每一个 R 或 R’ 均独立地是H或是取代的或未取代的烷基(1-20C)(任选地含有醚(-0-)键)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或araldyl。多核苷酸中并不是所有的连接都需要相同。前面的描述适用于本文中提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。抗体“可变区”指单独的抗体轻链可变区或抗体重链可变区或者两者的组合。重链和轻链的可变区均各自由通过三个互补决定区(CDR，也称作超变区)连接在一起的4个构架区(FR)组成。每条链中的⑶R通过FR而紧靠在一起，并与来自另一链的⑶R—起促成抗体的抗原结合位点的形成。存在至少两种确定CDR的技术(I)基于交叉物种序列变异性的方法(SP，Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (第 5 版，1991, National Institutes of Health, Bethesda, MD));和(2)基于抗原抗体复合物的晶体学研究(Al-Iazikani 等(1997)，J. Molec. Biol. 273 :927-948))。本文中，⑶R可以指通过其中一种方法或者通过这两种方法组合确定的⑶R。抗体“恒定区”指单独的抗体轻链恒定区或抗体重链恒定区或者两者的组合。与抗体或多肽“优先地结合”或“特异地结合”(本文中可互换使用)的“表位”是本领域熟知的术语，确定此特异结合或优先 结合的方法也是本领域熟知的。如果分子与特定细胞或物质比其与其它细胞或物质能以更高的频率、更快的速度、更长的持续时间和/或更大的亲和力反应或结合，则称该分子表现出“特异的结合”或“优先的结合”。如果抗体与靶的结合比其与其它物质的结合具有更高的亲和性、亲和力、更为容易和/或持续时间更长，则该抗体“特异地结合”或“优先地结合”靶。例如，特异地或优先地与某A ^ ^40表位结合的抗体是这样的抗体，该抗体与该表位的结合比它与其它A P卜4(|表位或非A P卜4(|表位的结合具有更高的亲和性、亲和力、更为容易和/或持续时间更长。通过阅读该定义也可以理解，例如，特异地或优先地与第一靶结合的抗体(或部分或表位)可以或者不可以特异地或优先地与第二靶结合。如此，“特异的结合”或“优先的结合”不必要求(尽管它可以包括)排他式的结合。一般地，但不是必需的，提及到结合意味着优先的结合。本文中，“基本上纯的”指至少50 %纯(即，无杂质)、更优选地至少90 %纯、更优选地至少95%纯、更优 选地至少98%纯，更优先地至少99%纯的物质。“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，其可以是或者已经是用于掺入多核苷酸插入物的载体的受体。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，该后代由于自然的、偶发的或有意的突变而可以不必与原始亲本细胞完全相同(在形态学上或在基因组DNA互补性上)。宿主细胞包括在体内被本发明多核苷酸转染的细胞。术语“Fe区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区域。“Fe区”可以是天然序列的Fe区或者变异的Fe区。尽管免疫球蛋白重链Fe区的界限可以变化，但人IgG重链Fe区通常被定义为自Cys226或Pro230位置的氨基酸残基延伸至其羧基末端。Fe区中残基的编号为如 Kabat 等，Sequence of Proteins of Immunological Interest,第 5版，Public HealthService, National Institute of Health, Bethesda, Md. , 1991 中 EU 索引(EU index)的编号。免疫球蛋白Fe区一般包含两个恒定区，CH2和CH3。本文中，“ Fe区”和“FcR”描述与抗体Fe区结合的受体。优选的FcR是天然序列的人FcR。而且，优选的FcR是与IgG抗体结合U受体)的FcR，其包括Fe Y Rl、Fc Y RII和Fe Y RIII亚型受体，包括这些受体的等位变体和可变拼接形式。FcyRII受体包括Fe y RIIA ( “激活性受体”)和FcyRIIB( “抑制性受体”)，两者具有相似氨基酸序列，它们的主要差异在于它们的胞质域。关于FcR的综述见Ravetch和Kinet, 1991, Ann. Rev.Immunol. 9 :457-92 ； Cape I 等，1994, Immunomethods, 4 :25-34 ;和 de Haas 等，1995, J. Lab.Clin. Med. 126 :330-410 “FcR”也包括新生儿受体FcRn，该受体负责将母亲的IgG转移给胎儿(Guyer 等，1976, J. Tmmuno1. 117 587 ;和 Kim 等，1994, J. Tmmuno1. 24 249)。“补体依赖性细胞毒性”和“⑶C”指靶在补体存在下发生的裂解。补体系统的第一成分(Clq)与和关连抗原形成复合物的分子(例如抗体)结合，将导致补体活化途径的起始。为了评价补体活化，可以实施Q)C试验,例如Gazzano-Santoro等,J. Immunol. Methods,202 :163(1996)中描述的CDC试验。“功能性Fe区”具有天然序列的Fe区的至少一种效应子功能。示例性“效应子功能”包括Clq结合；补体依赖性细胞毒性(CDC) ；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调，等。该效应子功能一般需要Fe区与结合域(例如，抗体可变区结构域)组合，并且可以使用本领域已知用于评价此类抗体效应子功能的各种试验来进行评价。“天然序列的Fe区”包含与自然界中存在的Fe区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。“变异的Fe区”包含由于至少一个氨基酸修饰而不同于天然序列的Fe区的氨基酸序列但保留了该天然序列的Fe区的至少一种效应子功能的氨基酸序列。优选地，变异的Fe区与天然序列的Fe区或者亲本多肽的Fe区相比具有至少一个氨基酸替代，例如，在天然序列的Fe区中或在亲本多肽的Fe区中大约I个至大约10个氨基酸替代，优选地大约I个至大约5个氨基酸替代。本文中，变异的Fe区优选地与天然序列的Fe区和/或与亲本多肽的Fe区具有至少大约80%序列同一性，最优选地至少大约90%序列同一性，更优选地至少大约95%、至少大约96%、至少大约97%、至少大约98%、至少大约99%序列同一‘丨生。本文中，“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”和“ADCC”指细胞介导的反应，其中表达Fe受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体并随后导致靶细胞的裂解。目的分子的ADCC活性可以使用体外ADCC试验，例如，美国专利5，500, 362或5，821，337中所述的试验来评价。对于该试验有用的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和NK细胞。备选地，或者此外，目的分子的ADCC活性可以在体内，例如，在动物模型，例如Clynes等1998 PNAS (USA) 95 =652-656中公开的动物模型中评价。本文中，药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是可以有效地实现有益或期望结果的量。对于预防性应用，有益的或期望的结果包括诸如消除或降低疾病的风险、减轻疾病的严重性或延迟疾病的发作，其中所述疾病包括疾病的生物化学的、组织学的和/或行为上的症状、其并发症以及疾病发展过程中表现出的中间病理学表型。对于治疗性应用，有益的或期望的结果包括临床结果，例如，抑制、阻碍或降低淀粉样蛋白斑的形成，减少、除去、清除淀粉样蛋白斑，改善认知、逆转或减慢认知衰退、隔离或增加生物学液体中循环的可溶性AP肽、减少因该疾病导致的一种或多种症状(生物化学的、组织学的和/或行为上的)，包括其并发症和疾病发展过程中出现的中间病理学表型，增加该疾病患者的生活质量，降低其它药物治疗该疾病时所需的剂量，增强其它药物的效果，延迟疾病进展，和/或延长患者的存活时间。有效剂量可以分一次或多次施用。对于本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量是足以直接地或间接地实现预防性或治疗性治疗的量。在临床上可以理解，药物、化合物或药物组合物的有效剂量可以通过或者可以不通过与其它药物、化合物或药物组合物联合而实现。因此，可以在施用一种或多种治疗剂的情况下认定“有效剂量”，而且如果单个药剂在与一个或多个其它药剂联合时达到了或者可以达到期望的结果，则该单个药剂可被认为是以有效量给予的。本文中，“治疗”或“疗法”是用于获得有益的或期望的结果(包括临床结果)的方法。为了本发明目的，有益的或期望的临床结果包括，但不限于，以下之一种或多种抑制、阻碍或降低淀粉样蛋白斑的形成，减少、除去或清除淀粉样蛋白斑，改善认知、逆转或减慢认知衰退、隔离在生物学液体中循环的可溶性AP肽、减少组织(例如脑)中的AP肽(包括，可溶性的、寡聚体的和沉积的)，抑制、减慢和/或降低脑中AP肽的累积，抑制、减缓和/或降低AP肽在组织(例如脑)中的毒性作用、减少因该疾病导致的症状，增加该疾病患者的生活质量，降低其它药物治疗该疾病时所需的剂量，延迟疾病进展，和/或延长患者的存活时间。本文中，“延迟”阿尔茨海默氏病的发展意味着推迟、阻碍、减缓、阻止、平抑和/或延缓该疾病的发展。根据该疾病的病史和/或待治疗的个体，此延迟可以具有不同的时间长度。正如本领域技术人员明了的，充分的或显著的延迟可以，实际上，包括预防，即，个体不出现该疾病。“延迟”阿尔茨海默氏病的发展的方法是，与未使用该方法相比，在给定的时间框架内降低疾病发展的可能性和/或在给定的时间框架内降低疾病的程度的方法。该比较典型地使用统计学显著数量的个体基于临床研究进行。阿尔茨海默氏病的“发展”意味着阿尔茨海默氏病在个体内发作和/或进展。可以使用本文所述的标准临床技术检测阿尔茨海默氏病的发展。然而，发展也指最初可能检测不到的疾病进展。为了本发明的目的，进展指疾病状态的生物学过程，在此情况下，可以通过标准神经学检查、或患者访问来确定，或者可以通过更为专业的测试来确定。各种此类诊断试验包括，但不限于，神经成像、检测血清或脑脊液中特定蛋白质(例如，淀粉样肽和Tau)的水平变化、计算机化的X线断层摄影术(CT)、和核磁共振成像(MRI)。“发展”包括发生、复发和发作。本文中，阿尔茨海默氏病的“发作”或“发生”包括最初的发作和/或复发。 本文中，“联合”施用包括同时施用和/或在不同时间施用。联合施用也包括以共制剂的形式施用或者以分开的组合物的形式施用。本文中，联合施用意味着包括其中将抗
抗体和另一药剂施用给个体的任何情况，其中抗々0抗体和另一药剂的施用可以同时和/或分开进行。如本文中进一步讨论的，应当理解抗AP抗体和所述另一药剂可以以不同的给药频率或间隔施用。例如，可以每周施用抗AP抗体，而所述另一药剂可以以较低的频率施用。可以理解，抗AP抗体和所述另一药剂可以使用相同的施用途径或不同的施用途径施用。“生物学样品”包括各种从个体获得的样品类型，其可以用于诊断或监测试验中。该定义包括血液和生物学来源的其它液体样品、固体组织样品例如生物活检标本或组织培养物或来源于它们的细胞及其后代。该定义也包括在获得之后以任何方式被操作过的样品，所述操作为例如用试剂处理、增溶或富集某些成分如蛋白质或多核苷酸、或包埋在半固体或固体基质中以便用于切片目的。术语“生物学样品”包括临床样品，也包括培养的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物学液体和组织样品。“对象”(或者称作“个体”)是哺乳动物、更优选地人。哺乳动物也包括，但不限于，农畜(例如奶牛)、运动动物、宠物(例如猫、狗、马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。本文中，“载体”指能够向宿主细胞递送，优选地在宿主细胞中表达，一个或多个目的基因或序列的构建体。载体的例子包括，但不限于，病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂结合的DNA或RNA表达载体、包在脂质体中的DNA或RNA表达载体、以及某些真核细胞例如生产细胞。本文中，“表达控制序列”指指导核酸表达的核酸序列。表达控制序列可以是启动子，例如组成型或诱导型启动子，或增强子。表达控制序列与待转录的核酸序列可操作地连接。本文中，“药物可接受载体”包括当与活性成分组合时能够允许所述成分保持生物学活性并且其与个体的免疫系统不发生反应的任何物质。实例包括，但不限于，任何标准的药物载体，例如，磷酸缓冲盐水溶液、水、乳剂如油/水乳剂、和各种类型的润湿剂。对于气雾剂或肠胃外施用，优选的稀释剂是磷酸缓冲盐水或生理盐水(0.9%)。包含此类载体的组合物可以通过熟知的常规方法配制(见例如，Remington’ s Pharmaceutical Sciences,第 18 版，A. Gennaro,编，Mack Publishing Co.，Easton, P. A.，1990 ;和 Remington, TheScience and Practice of Pharmacy 第 20 版，Mack Publishing,2000)。术语“km”在本文中旨在指抗体与抗原结合的结合速率常数(on rate constant)。术语“kf”在本文中旨在指抗体自抗体/抗原复合物解离的解离速率常数(offrate constant)。
术语“Kd ”在本文中旨在指抗体抗原相互作用的平衡解离常数。组合物和制备组合物的方法抗0淀粉样蛋白抗体和多肽本发明提供与AP肽的C端结合的抗体。本发明提供与和A3卜43结合的抗体或多肽。一些实施方案中，所述抗体或多肽以比其结合A ^ H2和A P H3时更高的亲和性结合AP L。一些实施方案中，所述抗体与APi_38和AP i_39结合。一些实施方案中，所述抗体与AP 22_35结合。一些实施方案中,所述抗体与AP 28_4(|结合。一些实施方案中，所述抗体或多肽与AP ^上包括氨基酸25-34及40的表位结合。本发明还提供包含本文所述任何抗体或多肽(例如，抗体6G和其显示在表3中的变体或者来源于抗体6G和其显示在表3中的变体的多肽)；或本文所述多核苷酸的组合物，包括药物组合物。本文中，组合物包含一种或多种与A ^ H0的C端结合的抗体或多肽(其可以是或可以不是抗体)和/或一种或多种包含编码一种或多种与A ^ H0的C端结合的抗体或多肽的序列的多核苷酸。这些组合物还可以包含适宜的赋形剂，例如，本领域熟知的药物可接受赋形剂，包括缓冲液。本发明抗体和多肽的特征在于以下特征之任何(一个或多个)(a)与A ^ !_42和A P !_43结合；(b)与A P H。、A ^ !_42和A P !_43结合，其中与A ^ !_40结合的亲和性高于与A P H2和A P H3结合的亲和性；(C)与A e卜40上包括氨基酸25-34及40的表位结合；(d)与A 3 A ^ ^37> A ^ 和A P ^39结合，但是亲和性低于其结合A ^ ^36的亲和性；(e)以小于大约I il M的Kd与A @ 22_37结合；(f)与A P 22-35结合；(g)与A P 28-40结合；O1)不结合细胞中表达的APP ;(i)抑制个体中淀粉样蛋白斑的形成；(j)减少个体中的淀粉样蛋白斑；(k)治疗、预防、改善阿尔茨海默氏病或其它八0累积相关疾病(例如，Down氏综合症、帕金森病、多发性脑梗塞痴呆、轻度认知缺损、脑淀粉样血管病、抑郁、Creutzfeldt-Jakob病、伴有Lewy小体的痴呆)的一个或多个症状；(I)改善认知功能。本发明抗体和多肽也可以具有本文所述的受损的效应子功能。与报道的其它抗々0抗体不同，具有受损的效应子功能的抗体和多肽可以表现出期望的完全谱。例如，本发明组合物可以不造成显著或不可接受水平的任一种或多种下列情况脑血管系统中的出血(脑出血)；脑膜脑炎(包括改变的核磁共振扫描)；脑脊液中升高的白细胞计数；中枢神经系统炎症。因此，本发明提供任何以下物质，或包含任何以下物质的组合物(包括药物组合物)(a)抗体6G或其显示在表3中的变体；(b)抗体6G或其显示在表3中的变体的片段或区域；(c)抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链；(d)抗体6G或其显示在表3中的变体的重链；(e)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链和/或重链的一个或多个可变区；(f)抗体6G或其显示在表3中的变体的一个或多个⑶R(I，2，3，4，5，或6个⑶R) ； (g)来自抗体6G重链的⑶R H3 ； (h)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链的⑶R L3 ；
(i)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链的3个CDR; (j)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的重链的3个CDR ; (k)来自抗体6G或其显示在表3中的变体的轻链的3个CDR以及来自抗体6G或其显示在表3中的变体的重链的3个CDR ;和⑴包含(b)至(k)中的任意一个的抗体。本发明还提供包含以上项目任意一个或多个的多肽。抗体6G的⑶R部分(包括Chothia和Kabat⑶R)图解显示在图I中。⑶R区的确定是本领域技术人员熟知的。可以理解，在一些实施方案中，⑶R可以是Kabat和Chothia⑶R的组合(也称作“组 合⑶R”或“扩展⑶R”)。一些实施方案中，⑶R是Kabat⑶R。其它实施方案中，⑶R是Chothia⑶R。换言之，在具有一个以上⑶R的实施方案中，所述⑶R可以是Kabat、Chothia、组合⑶R或其组合中的任意一种。一些实施方案中，本发明提供多肽(可以是或可以不是抗体)，该多肽包含与6G或其显示在表3中的变体的至少一个⑶R、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或全部六个⑶R基本上相同的至少一个⑶R、至少两个、至少三个、或至少四个、至少五个或全部六个⑶R。其它实施方案包括具有与6G的或衍生自6G的至少两个、三个、四个、五个或六个⑶R基本上相同的至少两个、三个、四个、五个或六个⑶R的抗体。一些实施方案中，所述至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个⑶R与6G或其显示在表3中的变体的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个 CDR 有至少大约 85%、86%、87%、88%、89%、90%、95%、96%、97%、98 %或99 %的同一性。可以理解，为了本发明的目的，结合特异性和/或总的活性一般地得到保持，但是与6G或其显示在表3中的变体相比活性程度可以不同(可以较高或较低)。本发明还提供包含6G或其显示在表3中的变体的氨基酸序列的多肽(可以是或可以不是抗体)，其中所述氨基酸序列具有以下之任一抗体6G或其显示在表3中的变体的序列中的至少5个连续氨基酸、至少8个连续氨基酸、至少大约10个连续氨基酸、至少大约15个连续氨基酸、至少大约20个连续氨基酸、至少大约25个连续氨基酸、至少大约30个连续氨基酸，其中这些氨基酸中的至少3个来自6G (图I)或其显示在表3中的变体的可变区。一个实施方案中，所述可变区来自6G的轻链。另一实施方案中，所述可变区来自6G的重链。一个示例性多肽具有来自6G的重链可变区和轻链可变区的连续氨基酸(长度如上述)。另一实施方案中，所述5个(或更多个)连续氨基酸来自图I所示6G的互补决定区(⑶R)。一些实施方案中，所述连续氨基酸来自6G的可变区。本发明抗体和多肽的结合亲和性可以变化，不必(但可以)是特定的值或范围，如下述示例性实施方案。本发明抗体和多肽与AP ^的结合亲和性(Kd)可以是大约0. 10至大约0. 80nM、大约0. 15至大约0. 75nM、和大约0. 18至大约0. 72nM。一些实施方案中，所述结合亲和性是大约2pM、大约5pM、大约10pM、大约15pM、大约20pM、大约40pM、或大于大约40pM。一个实施方案中，结合亲和性是大约2pM至大约22pM。其它实施方案中，结合亲和性小于大约10nM、大约5nM、大约4nM、大约3nM、大约2nM、大约InM、大约900pM、大约800pM、大约700pM、大约600pM、大约500pM、大约400pM、大约300pM、大约200pM、大约150pM、大约100pM、大约90pM、大约80pM、大约70pM、大约60pM、大约50pM、大约40pM、大约30pM、大约IOpM0 一些实施方案中，结合亲和性为大约10nM。其它实施方案中，结合亲和性小于大约10nM、小于大约50nM、小于大约100nM、小于大约150nM、小于大约200nM、小于大约250nM、小于大约500nM、或小于大约1000nM。其它实施方案中，结合亲和性小于大约5nM。其它实施方案中，结合亲和性小于大约InM。其它实施方案中，结合亲和性为大约0. InM或大约0. 07nM。其它实施方案中，结合亲和性小于大约0. InM或小于大约0. 07nM。其它实施方案中，结合亲和性为从大约10nM、大约5nM、大约InM、大约900pM、大约800pM、大约700pM、大约600pM、大约500pM、大约400pM、大约300pM、大约200pM、大约150pM、大约100pM、大约90pM、大约80pM、大约70pM、大约60pM、大约50pM、大约40pM、大约30pM、大约IOpM中的任意一个至大约2pM、大约5pM、大约10pM、大约15pM、大约20pM、或大约40pM中的任意一个。一些实施方案中，结合亲和性是大约10hM、大约5nM、大约InM、大约900pM、大约800pM、大约700pM、大约600pM、大约500pM、大约400pM、大约300pM、大约200pM、大约150pM、大约lOOpM、大约90pM、大约80pM、大约70pM、大约60pM、大约50pM、大约40pM、大约30pM、大约IOpM中的任意一个。再其它实施方案中，结合亲和性为大约2pM、大约5pM、大约10pM、大约15pM、大约20pM、大约40pM或大于大约40pM。本发明抗体和多肽还可以与A 3卜36、A 3 !_37> A 3 !_38> A 3卜39、A 3 ^42和A 3 ^43中的任意一个或多个结合，但是与这些肽中的任意一个或多个的结合亲和性小于它们与a e卜#的结合亲和性。一些实施方案中，所述抗体或多肽与A P卜36、A P i_37、A P卜38、A P卜39、A ^ !_42和AP i_43中的任意一个或多个的Kd是其与AP ^的Kd的至少大约5倍、至少大约10倍、至少大约20倍、至少大约30倍、至少大约40倍、至少大约50倍、至少大约80倍、至少大约100倍、至少大约150倍、至少大约200倍或至少大约250倍。本发明还提供制备这些抗体或多肽中的任何抗体或多肽的方法。本发明抗体可以通过本领域已知的方法制备。例如,可以通过用AP肽(例如，AP 25-40作为免疫原)免疫哺乳动物，制备所述抗体。可以通过蛋白水解或其它的方式降解抗体，或通过如上述的重组方法(即，单个的或融合的多肽)或通过化学合成，而制备所述多肽。所述抗体的多肽，尤其是不超过大约50个氨基酸的较短多肽，可以通过化学合成方便地制备。化学合成方法是本领域已知的，并且是可以通过商业途径获得的。例如，可以通过自动多肽合成仪，使用固相方法，制备抗体。也参见美国专利5，807，715 ;4，816，567 ;和6，331，415。在另一备选方案中，抗体可以使用本领域熟知的方法重组制备。一个实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO :9和SEQ ID NO :10中所示编码抗体6G的重链和/或轻链可变区的序列。另一实施方案中，包含SEQ ID NO :9和SEQ ID NO :10中所示核苷酸序列的多核苷酸被克隆至一个或多个用于表达或扩增的载体中。编码目的抗体的序列在宿主细胞中可以维持在载体中，然后可以扩增宿主细胞并将之冷冻以备用。对载体(包括表达载体)和宿主细胞，本文将进一步作出描述。本发明还包括本发明抗体，例如6G，的单链可变区片段(“scFv”)。单链可变区片段可以通过使用短的连接肽将轻链和/或重链可变区连接在一起而制备。Bird等(1988)Science 242 :423_426。连接肽的一个实例是(GGGGS)3，其在一个可变区的羧基端和另一可变区的氨基端之间形成了大约3. 5nm的桥。具有其它序列的接头也已有设计和应用。Bird等(1988)。接头反过来可以被修饰以具有额外的功能，例如附着药物或附着固相支持物。所述单链变体可以通过重组方式或合成方式制备。对于scFv的合成制备，可以使用自动合成仪。对于scFv的重组制备，可以将含有编码该scFv的多核苷酸的适宜质粒导入适宜的宿主细胞，它可以是真核细胞如酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞，或者原核细胞例如大肠杆菌(E. coli)。编码目的scFv的多核苷酸可以通过常规操作例如多核苷酸的连接而产生。所得scFv可以使用本领域已知的标准蛋白质纯化技术分离。本发明也包括其它形式的单链抗体,例如diabody。Diabody是二价双特异性抗 体，其中VH和VL域表达在单一一条多肽链上，但是通过使用短至不允许同一条链上的这两个域发生配对的接头，从而迫使这些域与另一条链上的互补域配对而产生两个抗原结合位点(见例如，Holliger, P.等(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 ；Poljak,R.J.等(1994) Structure 2:1121-1123)。例如，双特异性抗体，对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体可以使用本文公开的抗体制备。制备双特异性抗体的方法是本领域已知的(见例如，Suresh等，1986, Methodsin Enzymology 121:210)。传统上,双特异性抗体的重组制备以共表达两对免疫球蛋白重链-轻链为基础，其中所述两条重链具有不同的特异性(Millstein和Cuello, 1983，Nature, 305 :537-539)。根据制备双特异性抗体的一个方法，将具有所述期望结合特异性的抗体可变域(抗体-抗原结合位点)与免疫球蛋白恒定域序列融合。该融合物优选具有包含至少一部分铰链，CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定域。优选地，在至少一个融合物中存在含有结合轻链所必需的位点的第一重链恒定区(CHl)。将编码这些免疫球蛋白重链融合物以及，如果期望的话，免疫球蛋白轻链的DNA插入分开的表达载体中，并共转染至适宜的宿主生物。在所述构建体中所用的这三条多肽链具有不等比率可以提供最佳产率的实施方案中，这使得可以极为灵活地调整这三个多肽片段的相互比例。然而，当至少两条多肽链以等比率表达可以导致高产率时或者当所述比率不具有特别意义时，将两条或全部三条多肽链的编码序列插入一个表达载体中是可能的。一个方法中，双特异性抗体由位于一条臂中的具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和位于另一臂中的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)组成。该不对称结构——免疫球蛋白轻链仅存在于该双特异性分子的一半中——有利于将期望的双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开。该方法描述在1994年3月3日公布的PCT公布号WO 94/04690中。包含两个共价连接的抗体的杂缀合抗体(heteroconjugate antibody)也在本发明范围内。此类抗体已经用于使免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利号4，676，980)和用于治疗HIV感染(PCT申请公开号WO 91/00360和WO 92/200373 ；EP 03089)。杂缀合抗体可以使用任何方便的交联方法制备。适宜的交联剂和技术是本领域熟知的，描述在美国专利号4, 676, 980中。嵌合或杂合抗体也可以使用合成蛋白质化学的已知方法，包括涉及交联剂的那些方法，在体外制备。例如，可以使用二硫化物交换反应或者通过形成硫醚键，构建免疫毒素。适用于此目的的试剂的例子包括亚氨基硫醇酯和甲基-4-巯基丁酰亚胺酸酯(butyrimidate)。包含抗体6G的一个或多个⑶R或者衍生自抗体6G的一个或多个⑶R的人源化抗体可以使用本领域已知的任何方法制备。例如，可以使用4个一般步骤对单克隆抗体实施人源化。这些步骤是(I)确定起始抗体轻链和重链可变域的核苷酸序列和预测的氨基酸序列；(2)设计人源化抗体，即，决定在此人源化过程中使用何种抗体构架区；(3)实际的人源化方法/技术；和(4)转染和表 达该人源化抗体。见例如，美国专利号4，816，567 ；5，807，715 ;5，866，692 ;6，331，415 ;5，530，101 ;5，693，761 ;5，693，762 ;5，585，089 ；6，180，370 ;5，225，539 ;6，548，640。在重组人源化抗体中，可以修饰Fe Y部分以避免与Fe y受体及补体免疫系统发生相互作用。剑桥大学病理学系的Mike Clark博士设计了该类型的修饰，并且在1999年11月18日公开的WO 99/58572中描述制备此类抗体的技术。例如，如果抗体用于临床试验和人类治疗中，则可以对恒定区进行工程化改造以便更类似于人类恒定区从而避免免疫反应。见例如美国专利号5，997，867和5，866，692。
本发明包括抗体6G的修饰形式，包括不显著影响其性质的功能等价抗体和具有增强的或减弱的活性和/或亲和性的变体。例如，可以突变抗体6G的氨基酸序列以获得具有期望的AP ^肽结合亲和性的抗体。多肽的修饰是本领域的常规操作，无需在此详细描述。在实施例中举例说明了对多肽的修饰。修饰的多肽的实例包括具有保守的氨基酸残基替代、一个或多个不显著有害地改变功能活性的氨基酸缺失或添加、或应用化学类似物的多肽。氨基酸序列插入包括长度从I个残基至含有100个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合，以及序列内的单个或多个氨基酸残基插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体或与表位标签融合的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体N或C端与酶或增加抗体血清半衰期的多肽的融合。 替代变体在抗体分子中去除至少一个氨基酸残基并在该位置插入不同的残基。对于替代诱变而言最有意义的位点包括超变区，但是FR改变也在考虑之列。保守替代显示表I中“保守替代”标题之下。如果此类替代导致生物学活性改变，则可以引入表I中命名为“示例性替代”的或者以下参考氨基酸类别进一步描述的更实质性改变，并筛选产物。表I:氨基酸替代
权利要求
1.单克隆抗体，其中所述抗体含有重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区含有三个与SEQ ID NO :1中所示的重链可变区的三个⑶R具有至少97%同一性的⑶R，其中所述的轻链可变区含有三个与SEQ ID NO :2中所示的轻链可变区的三个⑶R具有至少96%同一性的CDR。
2.权利要求I的抗体，其中所述抗体结合Αβ卜4(|的亲和力是其结合Αβ卜42和^卜43的亲和力的至少大约40倍。
3.权利要求2的抗体，其中所述抗体的Fab片段以大约IOnM或更低的亲和力结合A β j-40。
4.权利要求3的抗体，其中所述抗体的Fab片段以大约5ηΜ或更低的亲和力结合A β j-40。
5.权利要求I所述的抗体，其中所述抗体的同种型选自IgGl,IgG2, IgG3,和IgG4。
6.权利要求I所述的抗体，其中所述抗体包含含有Fe区的重链恒定区，其中所述重链恒定区具有受损的效应子功能。
7.权利要求6的抗体，其中Fe区中的N-糖基化被去除。
8.权利要求6的抗体，其中所述抗体的重链恒定区是含有氨基酸突变A330P331至S330S331的人IgG2a恒定区，其中所述氨基酸位置参照人野生型IgG2a序列以Kabat编号为基础。
9.权利要求6的抗体，其中所述抗体的重链恒定区是含有氨基酸突变E233F234L235至P233V234A235的人IgG4恒定区，其中所述氨基酸位置参照人野生型IgG4序列以Kabat编号为基础。
10.权利要求I所述的抗体，其中所述抗体是人抗体或人源化抗体。
11.权利要求I所述的单克隆抗体的片段，其中所述的片段具有或者保留所述单克隆抗体的结合特异性。
12.权利要求11的片段，其中所述片段是Fab、Fab’、F(ab’)2*Fv。
13.权利要求I的抗体，其中所述抗体含有重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区含有三个来自表3所示抗体的重链可变区的CDR ;及所述的轻链可变区含有三个自表3所示抗体的轻链可变区的CDR。
14.抗体重链，其含有三个来自表3所示抗体的重链的⑶R。
15.抗体轻链，其含有三个来自表3所示抗体的轻链的CDR。
16.多核苷酸,其含有编码权利要求I的抗体的核苷酸序列。
17.含有权利要求16的多核苷酸的载体。
18.包含权利要求17的多核苷酸的宿主细胞。
19.制备抗体的方法，包括在使得所述抗体产生的条件下培养权利要求18的宿主细胞；和自所述宿主细胞或培养物中分离所述抗体。
20.药物组合物，其含有有效量的权利要求I所述的抗体，和药物可接受赋形剂。
21.权利要求I的抗体在制备用于预防、治疗、抑制或延迟与改变的Αβ或βΑΡΡ表达或者Αβ肽的累积有关的疾病发展的药物中的用途。
22.权利要求21的用途，其中所述疾病是多发性脑梗塞痴呆、轻度认知缺损、脑淀粉样血管病、Down氏综合症、帕金森病、Creutzfeldt-Jakob病、伴有Lewy小体的痴呆或AIDS。
23.权利要求I的抗体在制备用于治疗受试者中阿尔茨海默氏病或延迟受试者中与阿尔茨海默氏病相关的症状发展的药物中的用途。
24.权利要求I的抗体在制备用于抑制受试者中淀粉样蛋白斑形成或减少受试者中淀粉样蛋白斑的药物中的用途。
25.权利要求I的抗体在制备用于改善受试者中认知或逆转受试者中与Aβ淀粉样蛋白沉积有关的认知衰退的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及抗β-淀粉样肽抗体及其使用方法。具体地，本发明描述抗β-淀粉样肽的C端侧的抗体以及使用这些抗体诊断和治疗阿尔茨海默氏病和Aβ肽相关疾病的方法。
文档编号C07K16/18GK102617733SQ20111022625
公开日2012年8月1日 申请日期2006年4月28日 优先权日2005年4月29日
发明者A·罗森塔尔, J·彭斯, 何维贤 申请人:瑞纳神经科学公司