T4多聚核苷酸激酶重组酶及其制备方法、表达基因、表达载体以及宿主细胞与流程

文档序号:11145126 阅读: 来源:国知局

技术特征:

1.一种T4多聚核苷酸激酶重组酶,其特征在于,包括:

(a)、由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的多肽;

(b)、和由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少98%同源性的多肽;或

(c)、由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的多肽,其中一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加。

2.一种表达基因,其特征在于,包括:

(a)、编码由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的多肽的多核苷酸,或者所述多核苷酸的互补链;

(b)、和编码由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的多肽的多核苷酸具有至少98%同源性的多核苷酸,或者所述多核苷酸的互补链;

(c)、编码多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互补链,所述多肽由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成,其中一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加,且所述多肽具有β-葡聚糖内切酶活性;或

(d)、编码多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互补链,所述多肽与由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少98%的同源性。

3.一种表达基因,其特征在于,包括:

(a)、由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸,或者所述多核苷酸的互补链;

(b)、和编码由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少98%同源性的多核苷酸,或者所述多核苷酸的互补链;或

(c)、编码多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互补链,所述多核苷酸序列由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成,其中一个或多个密码子被缺失、替代或增加。

4.一种表达载体,其特征在于,包括如权利要求2或3所述的表达基因。

5.根据权利要求4所述的基因表达载体,其特征在于,所述表达载体为pET-28a。

6.一种宿主细胞,其特征在于,包括如权利要求4或5所述的基因表达载体,所述宿主细胞为原核生物细胞。

7.如权利要求6所述的宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞为大肠杆菌。

8.如权利要求7所述的宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞为BL21。

9.一种T4多聚核苷酸激酶重组酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

提供如权利要求6~8中任一项所述的宿主细胞,诱导表达后收集表达完成后的宿主细胞;

对所述表达完成后的宿主细胞进行裂解后离心,保留上清液;以及

将所述上清液纯化后得到所述T4多聚核苷酸激酶重组酶。

10.根据权利要求9所述的T4多聚核苷酸激酶重组酶的制备方法,其特征在于,所述诱导表达的操作中,表达温度为16℃~20℃、诱导剂的终浓度为0.2mM~0.5mM,诱导表达的时间为12h~24h。

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