本发明属于医药中间体的合成
技术领域：
，具体涉及具有苯基并四氢吡咯结构的fshr拮抗剂及其制备方法。
背景技术：
：促性腺激素在人体中表现出重要的生理机能，比如新陈代谢、体温调节和生殖过程。它是由下丘脑合成和分泌的，通过诱导垂体中促卵泡激素（fsh）/黄体生成激素（lh）的分泌，并进一步诱导卵巢中各级卵泡的生长发育及排卵。fsh是哺乳动物生殖过程中的核心激素，女性生殖功能的内分泌调节主要通过由下丘脑、垂体和卵巢组成的生殖功能调节轴得以实现，其中垂体前叶分泌的fsh在胎儿性分化、胎儿期卵子峰发生和卵泡闭锁、性成熟期卵泡的发生发育和成熟、颗粒细胞芳香化酶活化和雄激素向雌激素的转化、生殖周期的调节中起到不可替代的关键作用。fsh对靶器官的作用主要由fsh受体（fshr）所介导。研究表明，fshr不仅只表达于性腺，也在骨骼、前列腺、卵巢表面上皮等其它组织的表达。fsh在体内水平过高，会导致骨质流失，一些激素依赖性疾病，如卵巢癌、前列腺癌、子宫内膜异位、卵巢过度刺激综合征等，都受fsh影响很大；通过抑制fsh的分泌，可以进而抑制性腺分泌性激素，导致血中疾病依赖性激素水平降低，抑制癌细胞的生长或预防、缓解、治疗其他病症；例如，西曲瑞克就是按照该机理对卵巢癌发挥抗增殖效应。本发明根据目前已有的fsh受体抑制剂药物分子，对其结构进行优化得到了一系列新型的fsh受体抑制剂药物分子，并对其进行了相关活性测试。技术实现要素：本发明解决的技术问题是提供了一种合成方法简单、分子结构新颖且对fsh受体作用效果较好的具有苯基并四氢吡咯结构的fshr拮抗剂及其制备方法。本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，具有苯基并四氢吡咯结构的fshr拮抗剂，其特征在于：该fshr拮抗剂的结构式为：，其中r为苯，对氟苯，对硝基苯。本发明所述的具有苯基并四氢吡咯结构的fshr拮抗剂的制备方法，其特征在于具体步骤为：a、2-氨基-4-羟基-苯乙酸甲酯与2-溴-4,5-二甲氧基苄溴在羟基氢活化催化剂钯/羟基磷灰石的作用下进行取代反应得到2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯；b、(boc)2o对2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯的2位氨基进行活化保护反应得到2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯；c、2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯在苯环氢活化催化剂钯/羟基磷灰石的作用下发生分子内缩合得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯；d、3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯在碱性溶液中经过酯水解后再酸化得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸；e、3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸在催化剂氢化铝锂的作用下进行羧基还原得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇；f、对甲苯磺酰氯在催化剂碳酸钾的作用下对3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇的2位羟基进行保护反应得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯；g、3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯在弱酸性催化剂吡啶氢溴酸盐的作用下脱去boc基团得到3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯；h、3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯脱去对甲苯磺酯基后进行分子内成环得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯；i、8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯与不同的羧酸化合物进行酰化反应得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯n-酰基苯化合物。进一步优选，步骤a的具体过程为：在反应容器中将2-氨基-4-羟基-苯乙酸甲酯和2-溴-4,5-二甲氧基苄溴加入到干燥的丙酮中，再加入羟基氢活化催化剂钯/羟基磷灰石，其中2-氨基-4-羟基-苯乙酸甲酯与羟基氢活化催化剂钯/羟基磷灰石的质量比为10:1，加热升温至80℃进行回流反应，反应4h后tlc监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入二氯甲烷中，再用纯净水洗涤三次，有机相经无水硫酸钠干燥后，蒸除溶剂，再经硅胶柱层析分离提纯得到纯净的2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯。进一步优选，步骤b的具体过程为：在反应容器中将2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯加入到乙腈中，再加入(boc)2o，在室温下搅拌反应直至tlc监控原料反应完全，蒸除反应溶剂乙腈，加水后水相用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂得到2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯。进一步优选，步骤c的具体过程为：在反应容器中将2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯加入到二甲基乙酰胺中，在n2保护下加入苯环氢活化催化剂钯/羟基磷灰石，其中2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯与苯环氢活化催化剂钯/羟基磷灰石的质量比为20:1，向反应体系中持续通入n2，同时排出n2，使其保持一个稳定流通环境，室温搅拌30min后密闭反应容器，再将反应容器放置在微波反应器中加热至130℃反应直至tlc监控原料反应完全，从微波反应器中取出反应容器并加入纯净水淬灭反应，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，最后经硅胶柱层析分离提纯得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯。进一步优选，步骤d的具体过程为：在反应容器中将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯加入到乙醇中，再加入溶有氢氧化钠的水溶液，升温至80℃反应直至tlc监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯洗涤水相三次，水相再用稀盐酸溶解调节ph为4，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，最后蒸除溶剂后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸。进一步优选，步骤e的具体过程为：在反应容器中将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯加入到无水thf中，反应温度降低至-60℃，滴加氢化铝锂的四氢呋喃溶液，保持温度继续反应2h，再缓慢升温至0℃继续反应2h，加入冰水淬灭反应，抽滤反应液，滤液用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相，蒸除溶剂后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇。进一步优选，步骤f的具体过程为：在反应容器中将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇和碳酸钾加入到二氯甲烷中，在氮气保护下于0℃加入溶有对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，升至室温反应直至tlc监控原料反应完全，加入稀盐酸淬灭反应，水相ph为6-7，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯。进一步优选，步骤g的具体过程为：在反应容器中将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯加入到四氢呋喃中，再加入弱酸性催化剂吡啶氢溴酸盐，室温搅拌反应，最后蒸除溶剂得到3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯。进一步优选，步骤h的具体过程为：在反应容器中将3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯加入到乙腈中，机械搅拌，加热至70℃反应直至tlc监控原料反应完全，减压蒸出溶剂乙腈，再加入正己烷，冷却至-5℃，搅拌过程中有大量固体析出，过滤反应液得到固体，并用冷甲苯洗涤，滤饼烘干后得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯。进一步优选，步骤i的具体过程为：在反应容器中将8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯、羧酸类化合物、1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐、二异丙基乙胺和1-羟基苯并三唑加入到n,n-二甲基甲酰胺中，室温反应直至tlc监控原料反应完全，向反应液中加入纯净水，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，然后用无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析分离提纯得到纯品fsh拮抗剂药物分子。本发明所述的具有苯基并四氢吡咯结构的fshr拮抗剂的具体合成路线为：。本发明合成工艺简单且成本低廉，经过活性测试可知制得的fsh受体拮抗剂药物分子对fsh受体的作用效果较好，有望进一步推广应用。具体实施方式以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。实施例1在反应瓶中加入二氯化钯5g，再加入质量比为1:1的甲醇与水的混合溶液250ml，然后加入羧甲基纤维素钠1g，用碳酸钠调节体系的ph为4.5，加入羟基磷灰石50g，在室温下搅拌2h后放入高压釜中，在100kpa，100℃条件下搅拌加氢还原反应2h，减压抽滤，去离子水洗至中性且经硝酸银溶液检测无氯离子，在常压60℃条件下干燥3h得到钯/羟基磷灰石40g。实施例2在反应瓶中，将2-氨基-4-羟基-苯乙酸甲酯1g和2-溴-4,5-二甲氧基苄溴2g加入到干燥的丙酮160ml中，再加入钯/羟基磷灰石0.1g，缓慢升高温度至80℃进行回流反应，反应4h后tlc监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入二氯甲烷100ml中，再用纯净水40ml洗涤三次，有机相经无水硫酸钠干燥后，蒸除溶剂，再经硅胶柱层析分离提纯得到纯净的2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯1.26g，收率95%；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.63(s,1h),7.79(s,1h),7.11(s,1h),7.03(s,1h),6.77(s,2h),6.56-6.50(m,2h),6.11(s,1h),5.08(s,2h),3.92(s,3h),3.89(s,3h),3.86(s,3h)。实施例3在反应瓶中，将2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯2.0g和(boc)2o3.0g加入到乙腈20ml中，在氮气保护中升至室温反应3h，tlc监控[展开剂:pe:ea=10:1]原料反应完全，整除溶剂乙腈后在加入一定量的水，水相再用二氯甲烷10ml萃取三次，合并有机相，加入无水硫酸钠10g除去有机相残留水分，蒸除溶剂后得到2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯1.9g。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.57(s,1h),7.59(d,j=8.8hz,1h),7.42(s,2h),7.16(s,1h),7.08(s,1h),7.03(s,1h),6.59-6.55(m,2h),5.16(s,1h),3.97-3.89(m,6h),2.31(s,3h),1.17(s,9h)。实施例4在反应瓶中，将2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苄氧基)-苯乙酸甲酯2g和钯/羟基磷灰石0.1g加入到二甲基乙酰胺30ml中，往反应体系中不停通入n2，同时排出n2，使其保持一个稳定流通环境，室温搅拌30min后密闭反应瓶，把其放置在微波反应器中，加热到130℃反应2h，tlc监控原料反应完全，从微波反应器中拿出反应瓶，加入一定量的纯净水淬灭反应，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，最后经硅胶柱层析分离提纯得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯1.66g，收率为97%；1hnmr(400mhz,cdcl3):8.97(s,1h),7.95-7.61(m,2h),7.31-7.25(m,2h),5.11(s,2h),4.61-4.50(m,6h),3.97(s,3h),3.40(d,j=12.0hz,2h),1.14(s,9h)。实施例5在反应瓶中，将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯2g加入到乙醇20ml中，再加入溶有氢氧化钠2g的水溶液15ml，升温至80℃反应1h，tlc监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯洗涤水相三次，水相再用稀盐酸溶解调节ph为4，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，最后蒸除溶剂后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸1.7g；1hnmr(400mhz,cdcl3):9.15(s,1h),7.81-7.67(m,2h),7.31-7.25(m,2h),5.13(s,2h),4.61-4.50(m,3h),3.97(s,3h),3.42(d,j=12.0hz,2h),1.19(s,9h)。实施例6在反应瓶中，将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸5g加入到无水thf50ml中，反应温度降低至-60℃，缓慢滴加氢化铝锂的四氢呋喃溶液20ml，滴加完后保持温度继续反应2h，再缓慢升温至0℃，继续反应2h，加入一定量的冰水淬灭反应，抽滤反应液，滤液用乙酸乙酯20ml萃取多次，合并有机相，蒸除溶剂后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇4.2g；1hnmr(400mhz,cdcl3):9.15(s,1h),7.69-7.37(m,4h),5.21(s,1h),5.09(s,1h),4.61-4.50(m,3h),3.97(s,3h),3.63-3.55(m,5h),1.16(s,9h)。实施例7在反应瓶中，将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇5.0g和碳酸钾5.0g加入二氯甲烷20ml中，在0℃条件下，氮气保护中，缓慢滴加溶有对甲苯磺酰氯(2.0g)的二氯甲烷(30ml)溶液，滴加完后升至室温反应3h，tlc监控[展开剂:pe:ea=10:1]原料反应完全，用0.5mol/l稀盐酸(10ml)淬灭反应液，水相ph为6-7，分出有机相，水相再用二氯甲烷(10ml)萃取三次，合并有机相，加入无水硫酸钠(10g)除去有机相残留水分，蒸除溶剂后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯(4.3g)。1hnmr(400mhz,cdcl3):9.13(s,1h),7.91-7.82(m,2h),7.69-7.37(m,4h),7.22-7.17(m,2h),5.15-5.11(m,2h),4.55(s,3h),3.93(s,3h),3.63-3.55(m,5h),2.36(s,3h),1.16(s,9h)。实施例8在反应瓶中，将3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯10g加入到四氢呋喃100ml中，再加入一定量的吡啶氢溴酸盐10g，室温搅拌一定时间，tlc监控原料反应完全，最后蒸除溶剂后加入一定量的纯净水，用氯仿萃取水相三次，合并有机相，蒸除氯仿后得到3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯8.5g；1hnmr(400mhz,cdcl3):9.09(s,1h),7.95-7.89(m,3h),7.61-7.49(m,3h),7.23-7.19(m,2h),5.19-5.17(m,2h),4.54(s,3h),3.93(s,3h),3.61-3.58(m,5h),2.24(s,3h)。实施例9在反应瓶中，将3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基对甲苯磺酸酯10g加入到乙腈100ml中，机械搅拌，加热至70℃，反应10h后经tlc监控[展开剂:pe:ea=7:1]原料反应完全，减压蒸出溶剂乙腈，再加入一定量的正己烷700ml，冷却至-5℃，搅拌过程中逐渐有大量固体析出，过滤反应液得到固体，并用一定量的冷甲苯200ml洗涤，滤饼烘干后得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯7.6g。实施例10在反应瓶中，将1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐0.092g加入到溶有8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯2.0g、二异丙基乙胺0.167ml、1-羟基苯并三唑0.065g和苯甲酸1g的dmf20ml中，在室温条件下反应24h，tlc监控原料反应完全后，加入一定量的纯净水，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析分离提纯得到纯品8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯-n-酰胺基甲苯2.2g；1hnmr(400mhz,cdcl3):7.78-7.68(m,5h),7.53-7.45(m,3h),7.11(s,1h),5.10(s,2h),4.69-4.65(m,2h),3.67-3.61(m,6h),3.22-3.20(m,2h)。实施例11在反应瓶中，将1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐0.092g加入到溶有8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯2.0g、二异丙基乙胺0.167ml、1-羟基苯并三唑0.065g和对硝基苯甲酸1.6g的dmf20ml中，在室温条件下反应24h，tlc监控原料反应完全后，加入一定量的纯净水，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析分离提纯得到纯品8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氢吡咯-n-酰胺基甲对硝基苯2.4g;1hnmr(400mhz,cdcl3):7.79-7.60(m,4h),7.52-7.47(m,3h),7.11-7.10(m,1h),5.12(s,2h),4.69-4.68(m,1h),4.64-4.65(m,1h),3.64-3.60(m,6h),3.21-3.19(m,2h)。实施例12抗肿瘤活性测试收集生长期卵巢癌细胞ovcar-3，以mts法测定一下化合物的抗癌活性，将细胞以适当浓度（每毫升4×104个细胞）加到96孔细胞培养板中（含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液），培养24小时后，在37℃、体积浓度为5%的co2条件下与不同浓度的化合物作用72小时，然后将mts（最终质量浓度2mg/ml）和dms（最终摩尔浓度30μm）的混合物直接加入含细胞的培养基中，继续置培养箱孵育4h。作用4h后，弃去上清液，每孔加入150μldmso，振荡，细胞存活率通过其对mts作用的代谢物在酶联免疫监测仪490nm波长下的吸收率测定化合物ic50/(μmol·l-1)47.620.361.8初步生物活性测试表明，该类化合物在卵巢癌细胞ovcar-3中对癌细胞均有抑制作用。综上所述，本发明提供了具有苯基并四氢吡咯结构的fshr拮抗剂及其制备方法，这是该类化合物该用途的首次发现，具有重大的研发潜力。以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。当前第1页12