本发明属于生物制品技术领域，涉及一种人血白蛋白的制备方法及用该方法制备的人血白蛋白。
背景技术：
人血白蛋白是从健康人血浆中提取的蛋白制剂，人血白蛋白主要用于因失血、创伤及烧伤等引起的休克，脑水肿及大脑损伤所致的脑压增高，对防治低蛋白血症及肝硬化或肾病引起的水肿或腹水有较好的疗效，是救死扶伤的必备药物。目前国内主要采用低温乙醇工艺进行分离纯化，不同厂家采用低温乙醇工艺的参数及工艺步骤略有不同，因此在市场上销售的人血白蛋白制品质量有差异。激肽释放酶原激活剂(pka)和多聚体含量是人血白蛋白制剂临床应用上产生不良反应的最大因素，因此，如何在制备工艺中，探索降低pka以及多聚体含量的方法，一直是从业人员特别关注的重点。
血浆凝血因子ⅻ经表面激活成ⅻa后，激活激肽释放酶原(pk)，生成激肽释放酶(k)，k使激肽酶释放出缓激酶，导致血管舒张、毛细血管透性增加进而血压下降等不良反应。这些活化的因子ⅻ片段就叫做激肽释放酶原激活剂(pka)。临床上在使用含大量pka的血液制品(如人血白蛋白等)过程中，会引起患者血压下降、面色潮红、呼吸困难等不良反应。对此国家相关部门有相应的强制规定：《中国药典》2015年版三部规定人血白蛋白成品中“激肽释放酶原激活剂(pka)”含量应不高于35iu/ml，
正常人体血液中并不存在白蛋白多聚体，由于含多聚体的白蛋白制品被注入人体后，可导致血液中白蛋白胶体渗透压下降，在体内排泄加快，因此临床使用多聚合体含量过高的白蛋白制品，将影药物的安全有效。《中国药典》2015年版三部规定人血白蛋白成品中“多聚体含量”应不高于5％。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种能够有效降低人血白蛋白成品中激肽释放酶原激活剂(pka)和多聚体的白蛋白制备方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种人血白蛋白制备方法，该方法包括如下步骤：步骤一、以低温乙醇法从人血浆中提取组分ⅳ上清液为原料；步骤二、对组分ⅳ上清液进行精滤处理；步骤三、将精滤处理获得的澄清液用0.5mol/l醋酸(含40％乙醇)溶液调节ph调至4.80±0.1获得组分ⅴ沉淀；步骤四、组分ⅴ沉淀溶解后纯化处理获得人血白蛋白成品；
其中步骤二所述的对组分ⅳ上清液进行精滤处理方法，
(1)降温处理：组分ⅳ上清液降至-6—-10℃；
(2)硅藻土吸附：加入硅藻土，加量为2～10g/l，搅拌吸附时间≥30分钟；
(3)滤板精滤：用滤板进行精滤，过滤时环境温度控制在10℃以下，过滤压力不超过0.3mpa，收集过滤后澄清液；
其中，步骤四所述的组分ⅴ沉淀溶解后纯化处理获得人血白蛋白成品具体过程包括如下步骤：
(1)纯化：按最终每公斤沉淀30/95(l)补加95％乙醇和0℃注射用水至fⅴ沉淀重量的5倍体积进行搅拌溶解，然后调节ph至4.50～4.70，控制温度在-2～-3℃进行搅拌过滤。
(2)超滤：用10kd膜包超滤器进行浓缩，再用1％和0.7％的氯化钠溶液分别对制品进行等重量透析4次和5次的透析。
(3)配液，根据产品规格配制相应蛋白含量、na+含量≤150mmol/l、k+含量≤2mmol/l、辛酸钠含量约为0.160±0.02mmol/g.蛋白质、ph值为6.8～7.0；
(4)巴氏灭活，巴氏灭活温度为60±0.5℃，巴氏灭活时间为10小时；
(5)除菌分装，用除菌滤芯根据产品规格进行除菌分装
本发明还提供一种通过上述方法获得的人血白蛋白，其中，该人血白蛋白成品中激肽释放酶原激活剂(pka)含量应不高于12iu/ml；多聚体含量不高于2％；人血白蛋白仅与抗人血浆产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊血浆不产生沉淀线；与正常人血浆比较，主要沉淀线为白蛋白。
本发明具有如下优点：
1、生产应用中操作简便，工艺稳定不影响到最终产品的收得率。2、成品中激肽释放酶原激活剂(pka)含量比《中国药典》2015年版降低60％，多聚体含量比《中国药典》2015年版降低60％，能极大提高人血白蛋白产品的安全性和有效性，具有良好临床应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明。
实施例1：
1.血浆获得
通过本公司单采血浆站采集健康人血浆
2.血浆领取
按生产指令要求，提取所需数量7983.585kg的合格血浆。
3.血浆合并及融化
在d级洁净厂，控制溶解水温＜37℃，采用水浴融化法进行血浆融化。融化后的血浆温度＜4℃。
4.组分ⅰ+ⅱ+ⅲ的乙醇沉淀及过滤分离
将融化后的血浆准确计量体积7549l后，按血浆体积的0.1倍的0.9％nacl溶液稀释至8305l，用ph4.0缓冲液调整ph6.3，添加-15℃以下的95％乙醇2216l，最终温度控制在-5℃；在反应液中分别按20g/l反应液加入硅藻土,用beco公司滤板进行固液分离，获得组分ⅰ+ⅱ+ⅲ上清。
5.组分ⅳ上清获得
将组分ⅰ+ⅱ+ⅲ上清13459l，用ph4.0缓冲液调整ph6.15，添加-15℃以下的95％乙醇4895l，最终温度控制在-5℃；在反应液中分别按15g/l反应液加入硅藻土,用beco公司滤板进行固液分离，获得组分ⅳ上清。
6.组分ⅳ精滤处理
将组分ⅳ降温至-6～-10℃，加入临江益瑞石公司的硅藻土，加量为2～10g/l，搅拌吸附时间≥30分钟，用beco公司滤板对进行精滤，过滤时环境温度控制在10℃以下，过滤压力不超过0.3mpa，收集过滤后澄清液。
7.组分ⅴ沉淀获得
将获得的澄清液21201l用0.5mol/l醋酸(含40％乙醇)溶液调节ph调至4.80±0.1，降温至-9～-10℃，用beco公司滤板对进行固液分离，获得组分ⅴ沉淀。
8.人血白蛋白获得
将组分v沉淀1047.8kg，按最终每公斤沉淀30/95(l)补加95％乙醇和0℃注射用水至fⅴ沉淀重量的5倍体积进行搅拌溶解，充分溶解2小时后，溶解液降温至-3℃，用beco公司滤板对进行固液分离，将过滤后上清用10kd膜包超滤器进行浓缩，再用1％和0.7％的氯化钠溶液分别对制品进行等重量透析4次和5次的透析，收集超滤液进行配液，最终配制为：蛋白含量20％、na+含量142mmol/l、k+含量0.1mmol/l、辛酸钠含量0.158mmol/g.蛋白质、ph值6.8。
将配液后的蛋白液进行60℃连续10小时恒温巴氏灭活,巴氏灭活后，除菌过滤分装，得到人血白蛋白成品。
9.检测
根据《中国药典》2015年版三部，抽样32瓶，进行检测，结果如下如表1所示：
表1成品人血白蛋白检测结果
可以知道，上述实施例仅为了说明发明原理而采用的示例性实施方式，然而本发明不仅限于此，本领域技术人员在不脱离本发明实质情况下，可以做出各种改进和变更，这些改进和变更也属于本发明的保护范围。