抗NECTIN4抗体和包含其的多特异性蛋白质复合物的制作方法

背景技术：

1、nectin和nectin样分子是参与钙非依赖性细胞粘附的细胞粘附分子。nectin细胞粘附分子4(nectin-4)，也称为pvrl4，是nectin家族的成员，其在免疫球蛋白超家族内。已报道nectin4在各种癌组织中作为肿瘤相关抗原，这些癌组织包括胰腺癌、卵巢癌、肺癌和乳腺癌。因此，nectin4可能是癌症治疗中有希望的靶点。

技术实现思路

1、本公开至少部分地基于以高结合亲和力和特异性结合nectin4的抗体，以及包含其的多特异性蛋白质复合物(例如，包含抗nectin4部分和细胞因子(例如，il2)部分的双特异性抗体和蛋白质复合物)的开发。

2、因此，本公开的一些方面提供了结合nectin细胞粘附分子4(nectin-4)的分离的抗体(“抗nectin4抗体”)。抗nectin4抗体与参考抗体结合相同的表位或与参考抗体竞争结合nectin-4。该参考抗体是以下中的一者：2020ep034-h09(又名ep034-h09)、2020ep034-b09(又名ep034-b09)、2020ep034-e01(又名ep034-e01)、2020ep47-f02(又名ep047-f02)、2021ep030-b10(又名ep030-b10)、2021ep030-c11(又名ep030-c11)、2021ep030-d06(又名ep030-d06)、2021ep030-e10(又名ep030-e10)、2021ep030-f02(又名ep034-f02)、2021ep030-h06(又名ep030-h06)、2021ep029-c04(又名ep029-c04)、2021ep032-d10(又名ep032-d10)，以及2021ep032-e06(又名ep032-e06)。在具体实例中，该参考抗体是ep034-b09。

3、在一些实施例中，抗nectin4抗体可以包含：(a)重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和重链互补决定区3(hc cdr3)，其中hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3共同与参考抗体的重链cdr至少80％相同；和/或(b)轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和轻链互补决定区3(lc cdr3)，其中lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3共同与参考抗体的轻链cdr至少80％相同。

4、在一些情况下，本文公开的抗nectin4抗体可以包含hc cdr，如与参考抗体的hccdr相比，这些hc cdr共同含有不超过8个氨基酸残基变化。替代地或附加地，抗nectin4抗体可以包含lc cdr，如与参考抗体的lc cdr相比，这些lc cdr共同含有不超过8个氨基酸残基变化。在一些情况下，抗nectin4抗体可以包含vh和/或vl，该vh与参考抗体的vh至少85％相同，该vl与参考抗体的vl至少85％相同。在一些情况下，本文公开的抗nectin4抗体对细胞表面上表达的nectin-4可以具有小于约25nm的结合亲和力。例如，结合亲和力可以小于10nm。在一些实例中，结合亲和力可以小于1nm。

5、在具体实例中，本文公开的抗nectin4抗体可以与参考抗体包含相同的重链互补决定区(hc cdr)和相同的轻链互补决定区(lc cdr)。在一些实例中，抗nectin4抗体与参考抗体包含相同的vh和相同的vl。

6、本文公开的任何抗nectin4抗体可以是人抗体或人源化抗体。在一些实施例中，该抗体可以是单链抗体(scfv)。替代地，该抗体可以是包含至少两种多肽的多链分子。在一些实例中，至少两种多肽中的每一种包含fc片段。

7、在其它方面，本公开的特征在于多特异性抗体，其包含：(a)结合nectin-4的第一结合部分；和(b)结合cd3的第二结合部分。在一些情况下，结合nectin-4的第一结合部分可以是本文公开的任何抗nectin4抗体(例如，衍生自克隆ep034-b09)。在一些情况下，结合cd3的第二结合部分可以衍生自克隆ep500或其变体(例如，ep695、ep696或ep697)。在一些实施例中，第一结合部分、第二结合部分或两者为单链可变片段(scfv)形式。替代地，第一结合部分、第二结合部分或两者为免疫球蛋白(ig)形式。在一个实例中，第一结合部分和第二结合部分中的一个是scfv形式，而另一个结合部分是ig形式。

8、在一些实例中，(i)第一结合部分包含第一重链和第一轻链，其中第一重链包含第一重链可变区(vh)和第一重链恒定区，该第一重链恒定区包含第一fc片段；并且其中第一轻链包含第一轻链可变区(vl)和第一轻链恒定区；并且(ii)第二结合部分包含第二重链和第二轻链，其中第二重链包含第二重链可变区(vh)和第二重链恒定区，该第二重链恒定区包含第二fc片段；并且其中第二轻链包含第二轻链可变区(vl)和第二轻链恒定区。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

9、在一些实例中，(i)第一结合部分包含第一重链、第二重链和轻链，其中第一重链包含vh和第一重链恒定区，该第一重链恒定区包含第一fc片段，其中第二重链包含vh和第二重链恒定区，该第二重链恒定区包含第二fc片段，并且其中轻链包含vl和轻链恒定区；并且(ii)第二结合部分是scfv片段，该scfv片段与(i)的第一重链或第二重链融合，任选地其中该scfv片段在第一fc片段或第二fc片段和vh之间与第一重链或第二重链融合。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

10、在一些实例中，(i)第一结合部分包含第一重链、第二重链和轻链，其中第一重链包含vh和第一重链恒定区，该第一重链恒定区包含第一fc片段，并且其中第二重链包含vh和第二重链恒定区，该第二重链恒定区包含第二fc片段，并且其中轻链包含vl和轻链恒定区；并且(ii)第二结合部分是仅重链片段(vhh)，该vhh片段与(i)的第一重链或第二重链融合，任选地其中该vhh片段在第一fc片段或第二fc片段和vh之间与第一重链或第二重链融合。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

11、在一些实例中，(i)第一结合部分包含第一重链和第一轻链，其中第一重链包含第一重链可变区(vh)和第一重链恒定区，该第一重链恒定区包含第一fc片段；并且其中第一轻链包含第一轻链可变区(vl)和第一轻链恒定区；并且(ii)第二结合部分是与第二fc片段融合的scfv片段。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

12、本文公开的任何多特异性抗体可以进一步包含细胞因子，该细胞因子任选地是il-2。在一些实施例中，该细胞因子与第一fc片段的c末端融合。在一些实施例中，该细胞因子与第二fc片段的c末端融合。在一些实施例中，该细胞因子与第一fc片段的c末端和第二fc片段的c末端两者融合。

13、在一些实施例中，本文公开的多特异性抗体可以进一步包含第三结合部分，其结合t细胞共刺激受体。这些实例包括但不限于icos、4-1bb、cd28或cd86。

14、在另一方面，本公开的特征在于蛋白质复合物，其包含结合nectin-4的第一部分和包含细胞因子(例如il-2)的第二部分。结合nectin-4的第一部分可以是本文公开的任何抗nectin4抗体。在一些实施例中，第一部分包含与第一fc片段融合的scfv片段；并且第二部分包含与第二fc片段融合的细胞因子。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

15、在一些实施例中，第一部分包含第一多肽和第二多肽，该第一多肽包含与第一fc片段融合的scfv片段，该第二多肽包含与第二fc片段融合的scfv片段。在一些实例中，第二部分的细胞因子与第一fc片段的c末端融合。在一些实例中，第二部分的细胞因子与第二fc片段的c末端融合。在一些实例中，第二部分的细胞因子与第一fc片段的c末端和第二fc片段的c末端两者融合。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

16、在一些实例中，(i)第一部分包含重链和轻链，该重链包含vh和重链恒定区，该重链恒定区包含第一fc片段，该轻链包含vl和轻链恒定区；并且(ii)第二部分包含与第二fc片段融合的细胞因子。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

17、在一些实例中，第一部分包含第一重链、第二重链和轻链，该第一重链包含vh和第一重链恒定区，该第一重链恒定区包含第一fc片段；该第二重链包含vh和第二重链恒定区，该第二重链恒定区包含第二fc片段；该轻链包含vl和轻链恒定区。在一些实例中，第二部分的细胞因子与第一fc片段的c末端融合。在一些实例中，第二部分的细胞因子与第二fc片段的c末端融合。在一些实例中，第二部分的细胞因子与第一fc片段的c末端和第二fc片段的c末端两者融合。第一fc片段和第二fc片段形成二聚体。

18、在本文公开的任何多特异性抗体和蛋白质复合物中，第一fc片段和第二fc片段包含突变，这些突变如相对于野生型对应物而言增强异二聚体化超过增强同二聚体化。在一些实施例中，突变是杵臼突变。例如，杵突变可以包含s354c、t366w和/或k409a。臼突变可以包含s354c、y349c、t366s、l368a、f405k和/或y407v。

19、此外，本公开提供了一种核酸或核酸组，该核酸组共同编码本文公开的任何nectin4抗体或本文还公开的任何多特异性抗体或蛋白质复合物。在一些实施例中，该核酸或该核酸组可以是载体或载体组。在一些实例中，该载体是表达载体。此外，本文提供了包含如本文公开的任何编码核酸或核酸组的宿主细胞。

20、此外，本文提供了药物组合物，其包含本文公开的任何抗nectin4或多特异性抗体、本文公开的任何蛋白质复合物、任何一种或多种编码核酸，或包含编码核酸的宿主细胞，以及药学上可接受的载体。

21、在其它方面，本公开的特征在于一种用于抑制受试者体内nectin-4或nectin-4+细胞的方法，该方法包含向有需要的受试者施用任何有效量的本文公开的药物组合物。在一些实施例中，受试者是具有nectin-4+致病细胞的人患者。在一些实例中，受试者是患有nectin-4阳性癌症的人患者。实例包括乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、肺癌或头颈癌。

22、此外，本公开的特征在于一种用于检测nectin的存在的方法，该方法包含：(i)将如本文公开的结合nectin4的抗体与疑似含有nectin-4的样品接触，以及(ii)检测抗体与nectin-4的结合。在一些情况下，该抗体与可检测标记缀合。在一些情况下，nectin-4在细胞表面上表达。在一些情况下，接触步骤通过向受试者施用抗体来执行。

23、此外，本公开提供了产生结合nectin-4的抗体或包含其的多特异性抗体或蛋白质复合物的方法，该方法包含：(i)在允许结合nectin-4的抗体、包含其的多特异性抗体或包含其的蛋白质复合物表达的条件下，培养宿主细胞，该宿主细胞包含编码如本文公开的抗nectin4抗体、多特异性抗体或蛋白质复合物的核酸；以及(ii)从细胞培养物收获由此产生的抗体、多特异性抗体或蛋白质复合物。

24、本文公开的用于治疗靶疾病(例如，与nectin4+细胞，如nectin4+癌细胞相关的疾病或病症)的任何抗nectin4抗体、多特异性抗体和蛋白质复合物以及此类抗体、多特异性抗体或蛋白质复合物用于制造用于治疗靶疾病的药物的用途也在本公开的范围内。

25、本发明的一个或多个实施例的细节在下面的描述中阐述。本发明的其它特征或优点将从下面的附图和若干实施例的详细描述以及所附权利要求中变得明显。