分离并检测罗氟司特及其中间体的方法
【专利摘要】本申请涉及分离并检测罗氟司特及其中间体的方法，该方法通过高效液相色谱法，采用反相色谱柱，以含有离子对试剂的pH=2-7.5的缓冲液为流动相A，以甲醇或乙腈为流动相B，检测波长为215nm，采用线性梯度洗脱方式进行分离及检测。
【专利说明】分离并检测罗氟司特及其中间体的方法
【技术领域】
[0001]本申请涉及药物的分离及检测方法，特别是涉及分离并检测罗氟司特及其中间体的方法。
【背景技术】
[0002]欧盟已于2010年7月批准由Nycomed公司制造的药物一罗氟司特(rof Iumilast,Daxas)上市，以用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)。罗氟司特为选择性磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂，是十多年来首次获得欧盟批准的新一类治疗COPD的药物。
[0003]通常需要经过几个关键的中间体合成步骤来化学合成罗氟司特。因此，罗氟司特中可能残留有各种中间体，这会影响到罗氟司特作为药物应用的质量和纯度。因此，建立罗氟司特及其中间体的分离检测方法以控制其质量和纯度是非常必要的，其中化学合成罗氟司特的各个中间体及罗氟司特的结构如下所示:
[0004]
【权利要求】
1.分离并检测罗氟司特及其中间体的方法，所述方法通过高效液相色谱法采用线性梯度洗脱方式对罗氟司特及其中间体进行分离并检测，其中实施高效液相色谱法的条件为:色谱柱为反相色谱柱，流动相A为含有离子对试剂的pH=2.0-7.5的缓冲液，流动相B为甲醇或乙腈,检测波长为215nm。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述离子对试剂为烷基磺酸盐，优选C5-C10烷基磺酸的钠盐，更优选庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠和癸烷磺酸钠，最优选癸烷磺酸钠。
3.如权利要求1-2中任一权利要求所述的方法，其中所述缓冲液为磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液，优选所述缓冲液中所含的缓冲对选自磷酸二氢钾-磷酸、磷酸氢二钾-磷酸、磷酸二氢钠-磷酸、磷酸氢二钠-磷酸和醋酸钠-醋酸，更优选磷酸二氢钾-磷酸和磷酸二氢钠-磷酸，最优选磷酸二氢钠-磷酸。
4.如权利要求1-3中任一权利要求所述的方法，其中在所述流动相A中所述离子对的浓度为1000ml水中含0.2g-4.0g离子对试剂。
5.如权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其中所述反相色谱柱中使用的填充剂为烷基硅烷的化学键合硅胶，所述烷基硅烷的化学键合硅胶优选为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，更优选为十八烷基硅烷键合硅胶。
6.如权利要求1-5中任一权利要求所述的方法，其中采用A、B两相进行所述线性梯度洗脱，按体积百分比计算，A%+B%=100%，所述线性梯度洗脱方式为(T8min，A%由60-80%变为 35~40%，8~25min，A% 保持 35~40%，25.0lmin, A% 由 35~40% 变为 60~80%，25.01 ~40min，A%保持60~80% ;所述线性梯度洗脱方式优选为(T8min，A%由80%变为40%，8~25min，A%保持40%, 25.0lmin, A% 由 40% 变为 80%, 25.01 ~40min，A% 保持 80%。
7.如权利要求1-6中任一权利要求所述的方法，其中所述色谱柱的柱温为20°C-35°C,优选为25°C-35°C，更优选为30°C。
8.如权利要求1-7中任一权利要求所述的方法，其中所述色谱柱的流速为0.6-1.2ml/min,优选为 0.8-1.2ml/min,更优选为 1.0ml/min。
9.如权利要求1-8中任一权利要求所述的方法，其中通过如下方法配制所述含离子对试剂的缓冲液:将0.8g~8.0g缓冲盐与0.2g~4.0g离子对试剂混合，加水1000ml溶解，并调节PH值为2.0-7.5 ;优选地，将0.8g~4.0g缓冲盐与0.6g~2.0g离子对试剂混合，加水1000ml溶解，并调节pH值为2.0-6.0 ;更优选地，将1.6g缓冲盐与离子对试剂1.2g混合，加水1000ml溶解，并调节pH值为2.5。
10.如权利要求1-9中任一权利要求所述的方法，其中所述流动相A的pH值为2.0-6.0，更优选为2.0-3.0，最优选为2.5。
11.如权利要求ι-?ο中任一权利要求所述的方法，其中将罗氟司特及其中间体溶于甲醇或乙腈中以制成待测样品的混合溶液，所述待测样品的混合溶液的浓度为每Iml混合溶液中含罗氟司特及其中间体各0.1-1.0mg0
12.如权利要求11所述的方法，其中将2μ 1-50 μ I的所述待测样品的混合溶液注入高效液相色谱仪中。
13.如权利要求1-12中任一权利要求所述的方法，其中所述罗氟司特的中间体选自下列物质中的一种或多种:3，4- 二羟基苯甲醛、3-羟基-4-( 二氟甲氧基)苯甲醛、3-(环丙基甲氧基)-4-( 二氟甲氧基)苯甲醛、3-(环丙基甲氧基)-4-( 二氟甲氧基)苯甲酸、4-氨基-3，5-二氯吡啶。
14.权利要求1-13中任一权利要求所述的方法在含有罗氟司特的药品的质量控制和质量检测中的用途。
15.如权利要求14所述的用途，其中所述含有罗氟司特的药品为含有罗氟司特的缓释剂、控释剂、片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、软膏剂、硬膏剂、栓剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、乳剂、混悬剂、溶液剂、 针剂、膜剂、或注射剂。
【文档编号】G01N30/06GK103630613SQ201210299424
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年8月21日 优先权日:2012年8月21日
【发明者】易崇勤, 朱丹, 郑少辉 申请人:北大方正集团有限公司, 方正医药研究院有限公司, 北大国际医院集团有限公司