动物源食品中多种兽药残留量的检测方法与流程

本发明涉及到检测领域，特别涉及到一种动物源食品中多种兽药残留量的检测方法。
背景技术：
：我国农业部在2003年(265)号公告中明文规定，不得使用列为禁用的兽药。但事实上，养殖户为了追求最大的经济效益，将禁用药物当作添加剂使用的现象相当普遍，如饲料中添加盐酸克仑特罗(瘦肉精)引起的猪肉中毒事件和运动员误服兴奋剂事件等。现有的动物源食品中磺胺类，甲氧苄氨嘧啶，磺胺氯吡嗪，喹诺酮类和金刚烷胺兽药残留的国标方法分别为：gb/t20759-2006，gb/t21316-2007，gb/t22951-2008，gb/t20366-2006，db212394-2014。以上五种传统的测试方法需要依照标准方法分别采用了不同的前处理过程和不同检测设备和条件，费时费力，延长了测试周期，减低本企业在测试行业中的竞争力，对本企业的持续发展造成阻碍。技术实现要素：本发明的主要目的为提供一种动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，以解决在同事测试多种兽药残留时耗时过长，测试步骤过多的问题。本发明提出一种动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，包括步骤：获取指定质量的样品；将指定质量的样品与第一指定量的提取剂混合，得到混合液；将上述混合液进行分离处理，得到分离液；对上述分离液进行固相萃取处理并收集流出液；在指定温度下对上述流出液进行氮吹处理，加入定容剂进行定容；过滤；检测滤液中的兽药含留量。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述将上述混合液进行分离处理的步骤包括步骤，将上述混合液，进行漩涡分散处理；进行超声提取，并持续第一指定时间；在指定转速下进行离心分离，并持续第二指定时间。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述指定转速包括10000rpm-20000rpm之间。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述在指定温度下进行氮吹处理，加入定容剂进行定容的步骤之前，还包括步骤：取第二指定量的上述流出液，并放入氮吹管中。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述过滤步骤为超滤。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述检测滤液中的兽药含留量的步骤包括：利用lc-ms/ms分析仪检测滤液中的兽药含留量。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述提取剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、二氯乙烷、氯乙烷、氯丙烷和氯丁烷中的一种，或水和乙腈的混合液。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述水和乙腈的混合液中水和乙腈的质量比在1:1-10之间。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述定容剂包括甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇和甘油中的一种与水的混合液。进一步地，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述指定温度包括15℃-55℃之间。本发明的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，与现有的检测技术相比，本发明的优点主要体现在：解决传统方法需要重复前处理的不必要操作，简化了前处理的流程，减轻了相关人员的工作量，提高人员的效率；解决原有动物源食品中多种兽药残留测试重复仪器测定的状况，提高了仪器的检测效率；降低成本，比传统方法节省5倍以上；减少有机溶剂的使用量，减少排放，有益环保。附图说明图1为本发明一实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的流程示意图；图2为本发明一实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的流程示意图；图3为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的盐酸克仑特罗(瘦肉精)含量示意图；图4为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的沙丁胺醇含量示意图；图5为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的环丙沙星含量示意图；图6为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的恩诺沙星含量示意图；图7为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的伊诺沙星含量示意图；图8为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的洛美沙星含量示意图；图9为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的诺氟沙星含量示意图；图10为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的氧氟沙星含量示意图；图11为本发明一具体实施例的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法的培氟沙星含量示意图。本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。另外，在本发明中涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。参照图1，在本发明实施例中，本发明提供一种动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，包括步骤：s1、获取指定质量的样品；s2、将指定质量的样品与第一指定量的提取剂混合，得到混合液；s3、将上述混合液进行分离处理，得到分离液；s4、对上述分离液进行固相萃取处理并收集流出液；s5、在指定温度下对上述流出液进行氮吹处理，加入定容剂进行定容；s6、过滤；s7、检测滤液中的兽药含留量。上述步骤s1，为取样步骤，一般为从目标物中提取少量目标物质进行检测的重要步骤之一，其具有在不影响目标物的主要性质的前提下，获得目标物进行测试得到各项数据的有效途径之一，被测物提取量需足够进行3-5次测试，取样时对被测物的取样区域选择过程要求具有随机性，不可在选择过程中掺杂主观性选择，在本发明实施例中，取样重量一般为0.5g-10g，优选为3g-6g。上述步骤s2-s6，为预处理步骤，一般为对目标物的在进行有效工序前的除杂提纯等目的的步骤，在某些特殊实验中预处理步骤还包括改变物质性质等目的。上述步骤s3，为检测步骤，一般为对进行上述取样和预处理步骤后的目标物进行指定的实验或检测步骤，一般获得直接数据或间接数据，其中，直接数据即为改数据直接为检测目标数值或结果的数据；间接数据为需通过对应的计算、替换或对比后才得到目标数值或结果的数据，检测结果一般根据检测设备、环境、预处理步骤和辅助品的偏差存在偏差值，其中预处理和辅助品差异在制定检测标准后，可以相应的有效避免其所带来的误差幅度。如上述步骤s1，获取指定质量的样品，一般为1g-10g，在本发明实施例中，优选为3g-6g，一般获取时在待测物上进行随机取点获取样品。如上述步骤s2，将指定质量的样品与第一指定量的提取剂混合，得到混合液，其中，上述样品的指定质量一般为一般为1g-10g，在本发明实施例中，优选为3g-6g；缓慢将指定质量的样品与第一指定量的提取剂混合，在混合过程中可进行适当的搅拌或摇晃，其中，上述提取剂一般为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、二氯乙烷、氯乙烷、氯丙烷和氯丁烷中的一种，或水和乙腈的混合液，在本发明实施例中，优选使用水和乙腈的混合液，且上述水和乙腈的混合液的混合质量比例一般为1：10，在本发明实施例中，优选为1:2-6之间，上述指定量一般为5.00ml-40.00ml之间，在本发明实施例中，优选为7ml-15ml之间，其中，在混合后在本发明实施例中，一般还会将样品与上述提取剂混合液进行漩涡分散处理，其中，上述旋涡分散处理过程一般持续1-20分钟，在本发明实施例中，优选为持续3-5分钟；在进行旋涡分散后，在本发明实施例中，一般还会进行超声提取处理，并持续一定时间，其中，在上述超声波提取过程中，上述超声波提取器提供的超声波频率一般在20khz-80khz之间，优选的超声波频率在20khz-50khz之间，在超声波功率一般在100w-800w之间，优选的超声波功率在100w-500w之间，上述超声波提取过程所持续时间一般在1-20分钟之间，在本发明实施例中，优选为1-10分钟。如上述步骤s3，将上述混合液进行分离处理，得到分离液，上述分离处理中，在本发明实施例中，优选使用离心分离机进行上述分离处理过程，其中，在该过程中上述离心分离机的转速一般为10000rpm-20000rpm之间，其中，在本发明实施例中，优选为10000rpm-15000rpm之间；上述离心分离机的运作时间一般在1-20分钟之间，在本发明实施例中，优选为1-10分钟。如上述步骤s4，对上述分离液进行固相萃取处理并收集流出液，其中，在上述萃取处理过程中，使用固相萃取柱进行，固相萃取柱(英文,简称specolumn，或solidphaseextractioncartridges，简称specartridges)是从层析柱发展而来的一种用于萃取、分离、浓缩的样品前处理装置。主要应用于各种食品、农畜产品、环境样品以及生物样品中目标化合物的样品前处理。固相萃取技术已经被广泛地使用在许多国标(gb/t)以及行业分析标准中。spe技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相物理萃取过程；也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。spe是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。如上述步骤s5，在指定温度下，取一定量的上述流出液进行氮吹处理，氮吹后加入定容剂进行定容，其中，上述指定温度括15℃-55℃之间，在本发明实施例中，优选为20℃-50℃之间，提取上述流出液的量一般在1ml-10ml之间，在本发明实施例中，优选为3ml-6ml之间，上述氮吹处理过程一般持续至上述流出液体积下降至2ml以下，优选下降至1ml以下，上述定容剂一般包括水和甲醇的混合液、甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇、纯净水和甘油中的一种，在本发明实施例中，优选使用水和甲醇的混合液；上述水和甲醇的混合液的混合质量比例一般为1：10，在本发明实施例中，优选为1:2-6之间，上述定容体积一般为1ml-3ml，在本发明实施例中，优选为1ml-1.5ml。如上述步骤s6，过滤，在本发明实施例中，上述过滤过程优选为超滤，其中，在发明实施例中，所使用的超滤膜优选为孔径为0.22μm的亲水ptfe超滤膜。如上述步骤s7，检测滤液中的兽药含留量，在上述检测滤液中的兽药含留量的步骤中，一般利用gc-ms(气相色谱-质谱)分析仪、lc-ms(液相色谱-质谱)分析仪或lc-ms/ms(液相二级质谱)分析仪检测滤液中的兽药含留量，在发明实施例中，优选使用lc-ms/ms分析仪检测。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述将上述混合液进行分离处理的步骤包括步骤，s31、将上述混合液，进行漩涡分散处理；s32、进行超声提取，并持续第一指定时间；s33、在指定转速下进行离心分离，并持续第二指定时间。如上述步骤s31，将上述混合液，进行漩涡分散处理，将样品与上述提取剂混合液进行漩涡分散处理，其中，上述旋涡分散处理过程一般持续1-20分钟，在本发明实施例中，优选为持续。如上述步骤s32，进行超声提取，并持续第一指定时间，其中，在上述超声波提取过程中，上述超声波提取器提供的超声波频率一般在20khz-80khz之间，优选的超声波频率在20khz-50khz之间，在超声波功率一般在100w-800w之间，优选的超声波功率在100w-500w之间，上述第一指定时间一般在1-20分钟之间，在本发明实施例中，优选为1-10分钟。如上述步骤s33，在指定转速下进行离心分离，并持续第二指定时间，上述离心分离步骤中，在本发明实施例中，优选使用离心分离机进行上述分离处理过程，其中，在上述离心分离过程中上述离心分离机的转速一般为10000rpm-20000rpm之间，其中，在本发明实施例中，优选为10000rpm-15000rpm之间；上述第二指定时间一般在1-20分钟之间，在本发明实施例中，优选为1-10分钟。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述指定转速包括10000rpm-20000rpm之间。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述在指定温度下进行氮吹处理，加入定容剂进行定容的步骤之前，还包括步骤：s8、取第二指定量的上述流出液，并放入氮吹管中。如上述步骤s8，取第二指定量的上述流出液，并放入氮吹管中，其中，上述第二指定量一般为1ml-10ml之间，在本发明实施例中，优选为3ml-6ml之间，上述氮吹管优选为玻璃氮吹管。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述过滤步骤为超滤，其中，在发明实施例中，所使用的超滤膜优选为孔径为0.22μm的亲水ptfe超滤膜。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述检测滤液中的兽药含留量的步骤包括：s71、利用lc-ms/ms分析仪检测滤液中的兽药含留量。如上述步骤s71，利用gc-ms分析仪、lc-ms分析仪或lc-ms/ms分析仪检测滤液中的兽药含留量，在发明实施例中，优选使用lc-ms/ms检测，其中，检测条件在本发明实施例中优选为：离子源：esi检测方式：mrm离子源温度：150℃电喷雾电压：2.0kv脱溶剂气流量：1000l/hr色谱柱：c18柱(poroshell100mm×4.6mm，4μm)或相当者柱温：30℃流速：0.3ml/min进样量：10μl流动相：a为0.5％的甲酸水、b为含0.5％的甲酸乙腈梯度洗脱程序：时间(min)a％b％0.0090103.0090103.1060406.0060406.10010010.00010010.00901018.009010表1在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上上述提取剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、二氯乙烷、氯乙烷、氯丙烷和氯丁烷中的一种，或水和乙腈的混合液，其中，在发明实施例中，优选使用水和乙腈的混合液。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述水和乙腈混合液中水和乙腈的质量比在1:1-10之间，其中，在发明实施例中，水和乙腈的质量比优选1:2-6之间。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述定容剂包括甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇和甘油中的一种与水的混合液，其中，在发明实施例中，优选使用水和甲醇的混合液，且上述水和甲醇的混合液中水和甲醇的质量比在1:1-10之间，其中，在发明实施例中，水和甲醇的质量比优选1:2-6之间。在本实施例中，上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法，上述第二指定温度包括15℃-55℃之间，在本发明实施例中，优选为30℃-45℃之间。参照图3-11，在以具体实施例中，使用上述的动物源食品中多种兽药残留量的检测方法对已通过加标(加标量1ng/ml)的对动物源食品进行测试，加标物为盐酸克仑特罗(瘦肉精)；沙丁胺醇；环丙沙星；恩诺沙星；伊诺沙星；洛美沙星；诺氟沙星；氧氟沙星；培氟沙星。在上述检测方法过程中，检测仪器工作条件为：离子源：esi检测方式：mrm离子源温度：150℃电喷雾电压：2.0kv脱溶剂气流量：1000l/hr色谱柱：c18柱(poroshell150mm×4.6mm，4μm)或相当者柱温：30℃流速：0.3ml/min进样量：10μl流动相：a为0.5％的甲酸水、b为含0.5％的甲酸乙腈梯度洗脱程序：时间(min)a％b％0.0090103.0090103.1060406.0060406.10010010.00010010.00901018.009010表2从检测结果可以看出上述盐酸克仑特罗(瘦肉精)；沙丁胺醇；环丙沙星；恩诺沙星；伊诺沙星；洛美沙星；诺氟沙星；氧氟沙星；培氟沙星的回收率均在60％-120％之内，回收率良好。以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的
技术领域：
，均同理包括在本发明的专利保护范围内。当前第1页12