本发明涉及微生物检测领域，具体的说，涉及了一种伏马毒素B1的快速检测方法及试剂盒。
背景技术：
伏马毒素 (Fumonisins) 是由串珠镰刀菌产生的真菌毒素，目前已发现有11种结构类似物，其中伏马毒素B1（FB1）是伏马毒素的主要组成，约占毒素总量的70%，是导致伏马毒素毒性作用的主要原因。自 1989 年发现伏马毒素以来，受到世界各国的普遍重视，许多国家对其进行了系统的研究。伏马毒素能够对玉米及其制品造成污染，而且在以谷物为原料的一些产品中如面条、啤酒、调味品，甚至在芦笋中也检测到了伏马毒素。研究证实伏马毒素可引发马的白脑软化症，神经性中毒而呈现意识障碍、失明和运动失调，甚至导致死亡。引发猪的肺水肿综合症，并可诱发人类的食道癌和肝癌、胃癌等疾病，从而对畜牧业和人类的健康构成危害。
目前，伏马毒素B1有多种测定方法，如薄层色谱法TLC，高效液相色谱法HPLC，液质联用技术等。但由于费事、灵敏度低、仪器设备昂贵、操作复杂且不适用于大批量样品检测等缺点，限制了该方法的广泛应用。免疫分析方法兴起于上世纪 80 年代，基于抗原抗体的特异性结合，具有灵敏、快速、特异、简便等优点，近年来已广泛应用到毒素残留的检测中。通常检测伏马毒素B1的酶联免疫试剂盒所需实验时间为1小时左右，若能缩短反应时间，简化实验步骤，可有效提高批量检测速度，增快企业检测伏马毒素B1的效率。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术的不足，从而提供一种灵敏度高、检测快速、成本低、效率高的伏马毒素B1的检测方法。
本发明的另一个目的是提供一种实现上述伏马毒素B1检测方法的试剂盒。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种快速检测伏马毒素B1的方法，包括以下步骤：（1）伏马毒素B1酶标板洗涤：在伏马毒素B1酶标板的反应孔中加入洗涤液，放置1分钟洗涤，去除反应孔中洗涤液至干，重复洗涤0-2次；
（2）伏马毒素B1酶标板加样：向洗涤后的伏马毒素B1酶标板反应孔分为伏马毒素B1标准溶液孔和待测样品溶液孔，在伏马毒素B1标准溶液孔中分别加入不同浓度的伏马毒素B1标准溶液，在待测样品溶液孔中加入待测样品溶液；
（3）加伏马毒素B1酶标工作溶液和抗体工作溶液：在加样后的伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别先后加入伏马毒素B1工作溶液和抗体工作溶液，混合均匀后，将伏马毒素B1酶标板放入37℃培养箱中孵育8-15分钟；
（4）洗涤：取出孵育后的伏马毒素B1酶标板，去除反应孔中的孵育溶液至干，后在反应孔中加入洗涤液，放置1分钟洗涤，去除反应孔中洗涤液至干，重复洗涤3-4次；
（5）显色：在洗涤后的伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别加入底物液和显色液，混合均匀后，放入37℃培养箱孵育8-15分钟；
（6）读取数值：取出显色孵育后的伏马毒素B1酶标板，在各个反应孔分别加入终止液，混合均匀后，放入酶标仪中读取各孔的吸光度数值，用数据处理软件进行处理得出浓度值。
一种快速检测伏马毒素B1的试剂盒，其特征在于，包括伏马毒素B1酶标板、伏马毒素B1标准溶液、伏马毒素B1酶标工作溶液、抗体工作溶液、底物液、显色液、终止液。
基于上述，所述伏马毒素B1标准溶液分别为0.5 ppb、1.5 ppb、4.5 ppb、13.5 ppb、40.5 ppb的伏马毒素B1标准溶液。
本发明的有益效果为：
（1）本申请伏马毒素B1的检测时间缩短到30分钟以内，提高检测速度，满足企业批量检测效率的要求；
（2）合并酶标工作溶液和抗体工作溶液的加样步骤，简化实验洗涤步骤，加快了实验反应进程，缩短检测时间，提高检测效率；
（3）在满足缩短反应时间，提高检测效率的同时，保证了检测的灵敏度和准确度。
具体实施方式
下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
实施例1
一种快速检测伏马毒素B1的试剂盒，包括伏马毒素B1酶标板、伏马毒素B1标准溶液、伏马毒素B1酶标工作溶液、抗体工作溶液、底物液、显色液、终止液。采用该试剂盒快速检测伏马毒素B1的方法，包括以下检测步骤：（1）伏马毒素B1酶标板洗涤：伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别加入250 µL（约5滴）洗涤液，放置1分钟洗涤，甩干，在吸水纸上拍干。
（2）伏马毒素B1酶标板加样：将洗涤后的伏马毒素B1酶标板放在框架上，对反应孔进行编号，设定1~6号孔为FB1标准对照孔，其余孔为样品孔。1~6号孔分别加入50 µL的FB1标准溶液0 ppb，0.5 ppb，1.5 ppb，4.5 ppb，13.5 ppb，40.5 ppb，其余孔加入相应的待测样液。
（3）加伏马毒素B1酶标工作溶液和抗体工作溶液：加样后的伏马毒素B1酶标板的各反应孔分别先后加入50µL的伏马毒素B1（FB1）酶标工作溶液和抗体工作溶液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使加入的FB1酶标工作溶液和抗体工作溶液的充分混匀，盖上盖子，放入37℃培养箱，孵育10 min。
（4）洗涤：取出孵育后的伏马毒素B1酶标板，甩干，拍干，再向该伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中加入250 µL（约5滴）的洗涤液，放置1 分钟洗涤，甩干并拍干。按上述洗涤操作重复洗涤4次。
（5）显色：将洗涤后的伏马毒素B1酶标板拍干后，再向伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使底物液和显色液充分混匀，盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育10 min。
（6）读取数值：取出显色孵育后的伏马毒素B1酶标板，在伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中加入50 µL的终止液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使反应板中的溶液充分混匀，放入450 nm酶标仪中读取各孔的吸光度（OD值）数值，用数据处理软件进行处理得出浓度值。
实施例2
本实施例是在实施例1的基础上，对下列步骤作出改进：（3）加伏马毒素B1工作溶液和抗体工作溶液：加样后的伏马毒素B1酶标板的各反应孔分别先后加入50µL的伏马毒素B1（FB1）酶标工作溶液和抗体工作溶液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使加入的FB1酶标工作溶液和抗体工作溶液的充分混匀，盖上盖子，放入37℃培养箱，孵育8 min。
（4）洗涤：取出孵育后的伏马毒素B1酶标板，甩干，拍干，再向该伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中加入250 µL（约5滴）的洗涤液，放置1 分钟洗涤，甩干并拍干。按上述洗涤操作重复洗涤3次。
（5）显色：将洗涤后的伏马毒素B1酶标板拍干后，再向伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使底物液和显色液充分混匀，盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育8min。
实施例3
本实施例是在实施例1的基础上，对下列步骤作出改进：（1）伏马毒素B1酶标板洗涤：伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别加入250 µL（约5滴）洗涤液，放置1分钟洗涤，甩干，在吸水纸上拍干，按上述洗涤操作重复洗涤2次。
（3）加伏马毒素B1工作溶液和抗体工作溶液：加样后的伏马毒素B1酶标板的各反应孔分别先后加入50µL的伏马毒素B1（FB1）酶标工作溶液和抗体工作溶液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使加入的FB1酶标工作溶液和抗体工作溶液的充分混匀，盖上盖子，放入37℃培养箱，孵育11 min。
（5）显色：将洗涤后的伏马毒素B1酶标板拍干后，再向伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使底物液和显色液充分混匀，盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育11min。
实施例4
本实施例是在实施例1的基础上，对下列步骤作出改进：（3）加伏马毒素B1工作溶液和抗体工作溶液：加样后的伏马毒素B1酶标板的各反应孔分别先后加入50µL的伏马毒素B1（FB1）酶标工作溶液和抗体工作溶液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使加入的FB1酶标工作溶液和抗体工作溶液的充分混匀，盖上盖子，放入37℃培养箱，孵育15 min。
（5）显色：将洗涤后的伏马毒素B1酶标板拍干后，再向伏马毒素B1酶标板的各个反应孔中分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液，轻轻振摇伏马毒素B1酶标板框架，使底物液和显色液充分混匀，盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育15min。
最后应当说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。