一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法与流程

本发明涉及利伐沙班领域，特别是涉及一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法。

背景技术：

1、fxa是凝血瀑布过程中的关键因子，止血过程中通过激活凝血酶原，增加凝血酶形成血栓，同时其对血小板活化密切相关。利伐沙班除了对于fxa的直接抑制作用外，还可以抑制血小板聚集。2020年一项研究发现，在没有凝血酶的情况下，fxa能直接促进血小板聚集和血栓的形成。fxa直接将par-1裂解，导致生理性相关血小板应答，如血小板聚集。fxa以及凝血酶受体活化肽(trap)诱导的聚集应答部分依赖于磷脂酰肌醇三激酶(pi3k)以及磷脂酶c(plc)通道。par-1受体抑制剂、利伐沙班能够抑制ca2+信号从而影响血小板水平、聚集以及血栓的形成。不依赖于凝血酶通过par-1激活裂解受体的作用对于病理生理性血栓具有重要的意义。

2、校准品用于定量检测时对检测项目的校准，是具有在校准函数中用作独立变量值的参考物质，一般包含2个到多个浓度水平；质控品用于检查分析仪器或方法的性能，是一种稳定的物质，用于验证分析仪器或方法的性能，目前为止，国际上还没有“利伐沙班riva国际标准参考物质”生产与商品化销售；也没有“利伐沙班riva校准品和质控品”的研发和注册。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，以解决背景技术中提出的目前为止，国际上还没有“利伐沙班riva国际标准参考物质”生产与商品化销售；也没有“利伐沙班riva校准品和质控品”的研发和注册的问题。

2、为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，包括以下步骤：

3、s1、利伐沙班校准品和质控品的赋值；

4、s2、利伐沙班校准品和质控品的配制。

5、优选的，所述s1步骤分为以下步骤：

6、a1、利伐沙班校准品的赋值；

7、a2、利伐沙班质控品的赋值；

8、所述s2步骤分为以下步骤：

9、b1、利伐沙班校准品的配制；

10、b2、利伐沙班质控品的配制。

11、优选的，所述a1步骤具体包括以下操作：

12、a11：以国际标物nibsc：lmwh11/176标示原始浓度为1068iu/ml，加10.68ml蒸馏水复溶为100iu/ml；

13、a12：以富含抗凝血酶atiii>100％的抗xa测定值为0iu/ml正常人血浆稀释为5iu/ml，继续以该正常人血浆稀释为低分子肝素lmwh校准品5点靶值浓度(如：0.00iu/ml、0.38iu/ml、0.85iu/ml、1.30iu/ml、1.80iu/ml)；

14、a13：在血凝仪上分别测试国际标物5点吸光度变化率dod/min各3次，计算各3次均值，在血凝仪上以5点国际标物稀释浓度的理论值为横坐标(将iu/ml乘上本试剂及校准品批号测定的换算系数成为ng/ml)，以测试获得的3次吸光度变化率dod/min均值为纵坐标，制作标准曲线；

15、a14：以此标准曲线回测校准品标示的5点靶值浓度，与国际标物稀释的浓度理论值作比较，计算相对偏差cv≤|±15％|为达标。

16、优选的，所述a2步骤具体包括以下操作：

17、a21：以国际标物nibsc：lmwh11/176标示原始浓度为1068iu/ml，加10.68ml蒸馏水复溶为100iu/ml，再以富含抗凝血酶atiii>100％的抗xa测定值为0iu/ml正常人血浆稀释为5iu/ml；

18、a22：以富含抗凝血酶atiii>100％的抗xa测定值为0iu/ml正常人血浆稀释为5iu/ml，继续以该正常人血浆稀释为低分子肝素lmwh校准品5点靶值浓度(如：0.00iu/ml、0.38iu/ml、0.85iu/ml、1.30iu/ml、1.80iu/ml)；

19、a23：在血凝仪上分别测试国际标物5点吸光度变化率dod/min各3次，计算各3次均值，在血凝仪上以5点国际标物稀释浓度的理论值为横坐标(将iu/ml乘上本试剂、校准品及质控品批号测定的换算系数成为ng/ml)，以测试获得的3次吸光度变化率dod/min均值为纵坐标，制作标准曲线；

20、a24：以此标准曲线回测质控品标示的高低2个水平靶值浓度，与国际标物稀释的浓度理论值作比较，计算相对偏差cv≤|±15％|为达标，赋值标示范围：靶值±2sdiu/ml。

21、优选的，所述b1步骤的具体操作为：

22、b11:以患者利伐沙班riva摄服20mg/日抗凝治疗后3小时采血3000转/分钟离心10分钟立刻上机检测，测试浓度峰值ng/ml，得出个体峰值吸收系数(如：(210ng/ml)/(20mg/7l)＝0.0735)；

23、b12:取自市售正规利伐沙班riva抗凝药物片剂20mg/片，以蒸馏水复溶配制成抗xa有效活性含量为21.00g/ml高浓度参考品，再以富含抗凝血酶atiii>100％的抗xa测定值为0iu/ml已检定合格的猪血浆稀释为1.05g/ml，继续以该猪血浆稀释为利伐沙班riva校准品5点有效活性靶值浓度(如：0.00iu/ml、0.38iu/ml、0.85iu/ml、1.30iu/ml、1.80iu/ml)。

24、优选的，所述b2步骤的具体操作为：

25、b21：获取利伐沙班riva校准品5点靶值分别为0.00ng/ml、79.80ng/ml、178.50ng/ml、273.00ng/ml、378.00ng/ml中178.50ng/ml、378.00ng/ml(非限定该浓度含量)的2个浓度值的半成品作为低浓度和高浓度质控品，通过上述国际标准参考物质配置成适宜的稀释浓度赋值，相对偏倚＜︱±15％︱为符合要求；

26、b22：分别以高低浓度质控品的靶值扩展±2sd为质控范围。

27、与现有技术相比，本发明能达到的有益效果是：本发明的利伐沙班校准品和质控品通过已有的lmwh国际标准参考物质(如nibrisc：11/176)来赋值研发生产的，从而获取溯源链中的参比途径，本发明的利伐沙班校准品和质控品研制方法建立，将推进xa抑制剂活性测定的拓展领域，并为利伐沙班riva的标准化测定提供可行性方案及范例。

技术特征：

1.一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，其特征在于：所述s1步骤分为以下步骤：

3.根据权利要求1所述的一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，其特征在于：所述a1步骤具体包括以下操作：

4.根据权利要求1所述的一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，其特征在于：所述a2步骤具体包括以下操作：

5.根据权利要求1所述的一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，其特征在于：所述b1步骤的具体操作为：

6.根据权利要求1所述的一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，其特征在于：所述b2步骤的具体操作为：

技术总结
本发明公开了一种利伐沙班校准品和质控品的研制方法，包括以下步骤：S1、利伐沙班校准品和质控品的赋值；S2、利伐沙班校准品和质控品的配制，本发明的利伐沙班校准品和质控品通过已有的LMWH国际标准参考物质(如N I BRI SC：11/176)来赋值研发生产的，从而获取溯源链中的参比途径，本发明的利伐沙班校准品和质控品研制方法建立，将推进Xa抑制剂活性测定的拓展领域，并为利伐沙班R IVA的标准化测定提供可行性方案及范例。

技术研发人员：喜庆,王平
受保护的技术使用者：江苏瑞庆诊断技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16