一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法与流程

本公开涉及生物技术检测领域，尤其涉及一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法。

背景技术：

无患子为无患子科，属乔木，其果实含有大量的皂苷成分可作为制作天然洗涤剂的原材料，因此经济效益显著。目前检测无患子总皂苷的方法主要有液相色谱质谱法、高效液相色谱法和香草醛-高氯酸/浓硫酸法两种。液相色谱质谱法能准确的测定和定量无患子皂苷，但是所用仪器设备造价昂贵，维护成本高，不易携带，所需操作人员的专业水平高，且线性范围窄，难以广泛应用于一般的工业快速检测。液相色谱质谱法高效液相色谱法存在所需设备昂贵、操作要求较高、需要昂贵的标准品等一系列的缺点。香草醛-高氯酸/浓硫酸法是以齐墩果酸为标准品，利用浓硫酸或高氯酸对无患子总皂苷脱水后与香草醛反应显色，通过对显色液光密度值得检测来定量总皂苷；此方法对假果皮或假果皮提取物等来源复杂样品的兼容性差，显色溶液的稳定性差，且采用浓硫酸或高氯酸对操作人员和环境的危害性大。因此，现有技术存在设备昂贵、没有无患子总皂苷标准品、兼容性差和方法危险性大等一系列问题，不太适合无患子皂苷原料或制品的质量控制和工业生产过程中的快速抽检。

技术实现要素：

基于此，本公开揭示了一种无患子总皂苷快速检测试剂盒；

所述试剂盒包括：干燥辅助剂、提取剂、水解剂、指示剂、中和剂、显色剂和标准品；

所述干燥辅助剂用于辅助液体样品的干燥；

所述提取剂用于提取固体样品中的无患子总皂苷；

所述水解剂用于无患子总皂苷的水解；

所述指示剂用于无患子总皂苷水解液的酸碱度指示；

所述中和剂用于中和无患子总皂苷水解液中的盐酸；

所述显色剂用于无患子总皂苷水解液的显色；

所述标准品用于无患子总皂苷定量的标准参照物。

本公开还揭示了一种无患子总皂苷快速检测方法，所述方法包括以下步骤：

s100、将待测样品溶液加入到干燥剂中，进行干燥；

s200、向干燥后的待测样品溶液和干燥剂的混合物或者固体样品中加入提取剂，充分振荡溶解后，置于离心机中，得到沉淀和上清液；

s300、取步骤s200中的上清液，加入水解剂，沸水浴至100℃后水解得到水解液；

s400、对所述水解液中加入指示剂；

s500、加入中和剂至溶液显红色为止；

s600、加入显色剂，沸水浴加热，得到显色液；

s700、将显色液定容至5ml-25ml，利用紫外可见光分光光度计在540nm波长下测定显色液的光密度值；

s800、将无患子总皂苷粉末用提取剂溶解配制成溶液，根据无患子总皂苷的质量，按照等比或者等差数列设定n个递增的梯度标准样品，并按照步骤s100-s700完成无患子总皂苷标准品的光密度值的测定；

s900、根据无患子总皂苷标准品的浓度和光密度值的线性关系制作标准曲线，并以其作为参考，利用步骤s700中得到的光密度值计算待测样品中的无患子总皂苷含量。

本公开具有以下有益效果：

本公开能够检测无患子果皮、无患子果皮提取液和含无患子皂苷日化用品等样品中的无患子总皂苷含量，兼容性强。目前尚无针对无患子总皂苷含量测定的试剂盒。目前的定量方法主要有香草醛比色法、高效液相谱法和液质联用质谱仪法，本公开与之相比较，具有操作简单、试剂安全性高、准确度高和成本低等综合优势。

说明书附图

附图1为本公开一个实施例中一种无患子总皂苷快速检测方法流程图。

具体实施方式

在一个实施例中，结合图1进行说明，本公开揭示了一种无患子总皂苷快速检测试剂盒，其特征在于，

所述试剂盒包括：干燥辅助剂、提取剂、水解剂、指示剂、中和剂、显色剂和标准品；

所述干燥辅助剂用于辅助液体样品的干燥；

所述提取剂用于提取无患子总皂苷；

所述水解剂用于无患子总皂苷的水解；

所述指示剂用于无患子总皂苷水解液的酸碱度指示；

所述中和剂用于中和无患子总皂苷水解液中的盐酸；

所述显色剂用于无患子总皂苷水解液的显色；

所述标准品用于无患子总皂苷定量的标准参照物。

本实施例能够检测无患子果皮、无患子果皮提取液和含无患子皂苷日化用品等样品中的无患子总皂苷含量，兼容性强。目前尚无针对无患子总皂苷含量测定的试剂盒。

在一个实施例中，所述干燥辅助剂包括硅藻土、石英砂或者不溶于所述提取剂的固体颗粒。

在本实施例中，所述干燥剂可选不溶于所述提取剂的固体颗粒，优选硅藻土和石英砂。

在一个实施例中，所述提取剂包括1∶1-1∶2的甲醇、乙酸溶液或其他不溶解糖类和水溶性物质的溶液。

在本实施例中，所述提取剂可以为不溶解糖类和水溶性物质的溶液，优选1∶1-1∶2的甲醇、乙酸溶液。

在一个实施例中，所述水解剂包括3-6mol/l的盐酸溶液。

在本实施例中，所述水解剂优选盐酸，是因为相对硫酸、磷酸等酸性溶液，盐酸的水解效果和安全性的综合性能最佳。

在一个实施例中，所述指示剂为0.1-0.5％的酚酞溶液。

在本实施例中，选择ph8.0变色的指示剂均可，酚酞最佳。

在一个实施例中，所述中和剂为3-6mol/l的氢氧化钠溶液。

在本实施例中，所述中和剂选择碱性溶液均可，氢氧化钠最佳。

在一个实施例中，所述显色剂为0.3-1％的3、5-二硝基水杨酸溶液。

在本实施例中，所述显色剂选择具有氧化性且能显色定量的试剂，比如磷钼酸溶液，而3、5-二硝基水杨酸溶液为最佳选择。

在一个实施例中，所述标准品为无患子总皂苷粉末。

在一个实施例中，本公开揭示了一种无患子总皂苷快速检测方法，所述方法包括以下步骤：

s100、将待测样品溶液加入到干燥剂中，进行干燥；

s200、向步骤s100中得到的待测样品溶液和干燥剂的混合物或者固体样品中加入提取剂，充分振荡溶解后，置于离心机中，得到沉淀和上清液；

s300、取步骤s200中的上清液，加入水解剂，沸水浴至100℃后水解得到水解液；

s400、向步骤s300的水解液中加入指示剂；

s500、向步骤s400的溶液中加入中和剂至溶液显红色为止；

s600、向步骤s500中加入显色剂，沸水浴加热，得到显色液；

s700、将步骤s600中的显色液定容至5ml-25ml(该体积兼容一般的紫外可见光分光光度计用量，太多造成不必要的浪费)，利用紫外可见光分光光度计在540nm波长下测定显色液的光密度值(显色后溶液的特征吸收波长为540nm)；

s800、将无患子总皂苷粉末用提取剂溶解配制成溶液，根据无患子总皂苷的质量，按照等比或者等差数列设定n个递增的梯度标准样品，并按照步骤s200-s700完成无患子总皂苷标准品的光密度值的测定；

s900、根据无患子总皂苷标准品的浓度和光密度值的线性关系制作标准曲线，并以其作为参考，根据步骤s700中得到的光密度值计算待测样品中的无患子总皂苷含量。

在本实施例中，目前的定量方法主要有香草醛比色法、高效液相谱法和液质联用质谱仪法，本实施例所述的方法与香草醛比色法、高效液相谱法和液质联用质谱仪法相比较，具有操作简单、试剂安全性高、准确度高和成本低等综合优势。

在一个实施例中，步骤s100中所述将待测溶液与干燥剂的质量体积比为1∶2-1∶5

在本实施例中，1∶2-1∶5的干燥剂用量可使液体分散成细小液体，低于1∶2则不利于液体分散。

在一个实施例中，步骤s200中所述待测样品溶液和干燥剂的混合物与提取剂的质量体积比为1∶2；

所述离心机的转速为8000-12000rpm，离心时间为5-10分钟。

在本实施例中，实验结果表明，12000rpm、5分钟和8000rpm、10分钟即可达到较好的固液分离效果。

在一个实施例中，步骤s300中所述上清液和水解剂的体积比为1∶1-1∶3，沸水浴至100℃后水解的时间为15-25分钟。

在本实施例中，上清液和水解剂的体积比为1∶1-1∶3可以保证合适的水解剂浓度，过高过低会使水解产生副反应或不充分。

实验结果表明，太短的水解时间导致水解不充分，太长的水解时间不经济。

在一个实施例中，步骤s400中水解液与指示剂的具体比例为：50ml水解液中加入40-60μl指示剂。

在一个实施例中，步骤s600中沸水浴的加热温度为100℃，加热时间为5-10分钟。

在本实施例中，实验结果表明，低于5分钟不能够充分反应，太长的水解时间不经济。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解；其依然可以对上述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替代；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术所述的精神范围。